白血病免疫学
白血病免疫学
第一节 白血病细胞的抗原及相应抗体
白血病细胞的免疫学检查主要是检测白血病细胞的免疫表型。即用特异的抗体检测白细胞的核、浆或膜上的抗原。是MIC分类中不可缺少的一部分。白血病细胞的抗原可以分为两类：一类是正常细胞系所具有的抗原，它在正常细胞分化发育过程中出现或消失；另一类是与细胞功能状态有关的抗原。还有少数特殊的肿瘤性质的抗原。
一、血细胞的种系和分化抗原
在临床应用中较普遍的有：
（一） 幼稚细胞
1 HLA-DR 抗原属于组织亲和性复合物Ⅱ。单抗来自不同的克隆而有不同的名称：如Q5/13、LN3、TAL.1B5(α)、DK22（β）。亦称为Ia。出现在多能干细胞最初分化阶段的B系淋巴细胞和髓系细胞，正常T系淋巴细胞不表达（但激活的T细胞可表达）。此种单抗可用于福尔马林固定的组织，一般不需要作抗原修复（但DK22仅能用于涂片）。
2 末端脱氧核苷转换酶（TDT） 单抗来自克隆HT-1、3、4、6。抗原存在于前体T和B淋巴细胞，抗体与细胞核反应。作为急性淋巴母细胞白血病的标记，阳性率可达90%以上。免抗体可用于石蜡切片（须微波处理）。计数100个肿瘤细胞，多于10%的细胞表达作为阳性。
（二） B系淋巴细胞
1 CD19 单抗来自克隆HD37，作为检测全B抗原的标志之一，在早期细胞即出现，直到浆细胞仍有反应，但多数骨髓瘤细胞丧失此抗原性，只能在涂片中检测。
2 CD20（或CD20cy） 抗原是分子量为33000-37000的糖蛋白，有3个疏水区，4次穿越细胞膜，抗原决定簇位于胞浆内部分，其基因位于11号染色体的长臂12-13.1。来自克隆L26，抗体与正常或肿瘤细胞浆内的抗原反应，是检测全B细胞最常用的抗体，能应用于福尔马林固定的组织，不需要修复抗原，与CD3合并用于初步区别T和B淋巴细胞。
3 CD21 亦称补体受体2（CR2），是一个145000λⅠ型膜糖蛋白，是补体C3d的受体，抗体来自克隆1F8或鹅多抗。在B细胞活化和增殖中起作用。成熟B细胞中的表达，只能在涂片中检测。石蜡切片并经特殊的热处理修复抗原检测到的是滤泡内的树突细胞。
4 CD22 来自克隆4KB128或To15。是全B细胞抗体，用于检测正常及肿瘤性B细胞，两种抗体都只能用于涂片。
5 CD23 抗原为45000膜糖蛋白。抗体来自克隆MHM6，成熟B淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、血小板和树突细胞均表达。
6 CD24 抗体来自克隆SN3，抗原为35000-45000膜涎糖蛋白。在前B、早B和成熟B细胞中表达，在激活B细胞中表达降低，在粒细胞中也有存在。浆细胞中不存在。它在B细胞分化和增殖中起作用。
7 CD79α CD79是一个二聚蛋白质，分子量约70000，有2个多肽链，分别称为CD79α和CD79β。前者的基因位于19号染色体q13.2-13.3，后者的基因位于17号染色体q23，来自克隆JCB117是CD79α的抗体，以往称为Iga，来自克隆HM57的抗体作用于抗原的细胞内区。前一个抗体可显示B细胞肿瘤的细胞外区表达的抗原分子，用于涂片和常规切片，但不能用于流式细胞仪检测。
8 免疫球蛋白（Ig） 抗人Ig的抗体有许多，分别与IgA(克隆6E2C1)、IgA的α链（兔多抗）、IgA、IgG、IgM的κ、λ（免多抗）、IgD（克隆IgD26）、IgD的δ链（免多抗）、IgE（克隆CIA-E-7、12，和E1）、IgEε链（免多抗）、IgG（克隆A57H）、IgG的γ链（免多抗）、IgG的CH2区（免多抗）、IgM（克隆R1/69）、IgM的μ链（免多抗）等，均可用于涂片和福尔马林固定的组织，但后者须经过抗原修复，免疫蛋白出现于B细胞胞浆(cyIg)早于细胞膜(smIg)，因此需区别胞浆阳性和膜阳性。
（三） T系淋巴细胞
1 CD2 亦称为E-玫瑰花受体，是分子量50000的跨膜蛋白，与CD58细胞外区的氨基端作用参与细胞粘附，促进T细胞活化，在T淋巴细胞、NK细胞和胸腺细胞中表达，单抗克隆为MT910，只能用于涂片，用作全T细胞抗体。
2 CD3 含5种多肽链，形成三种二聚体，各种单抗抗各个多肽。单抗有克隆T3-4B5和UCHT-1，只能用于涂片，免多抗（对CD3ε链）可用于福尔马林固定的组织（须经过抗原修复），用于检测正常和肿瘤性T细胞。
3 CD4/CD8 CD4亦称T4或Leu3，是分子量55000膜糖蛋白，含4个免疫球蛋白样区域，表达在T辅助细胞。CD8亦称T8或Leu2，是32000-34000细胞表面糖蛋白，表达在T毒性细胞。CD4单抗克隆为MT310，仅用在涂片。CD8单抗有两种：克隆DK25只能用于涂片。克隆C8/144B可用于福尔马林固定组织，但需修复抗原。CD4和CD8同时出现在一个T细胞，或一个T细胞没有CD4或CD8表达，均强烈提示为肿瘤性细胞。
4 CD5 是一个分子量67000Ⅰ型跨膜蛋白，70%正常外周血淋巴细胞表达CD5，事实上所有胸腺细胞与外周血T细胞均表达CD5。单克隆DK23（仅能用于涂片），克隆CD5/54/F6可用于福尔马林固定组织，（用微波修复抗原）但其结果不及涂片。95%正常人的T细胞表面有此抗原，B细胞淋巴瘤（中心细胞性）和慢性淋巴细胞白血病（B细胞性）亦表达。少数正常B细胞亦可表达。
5 CD7 是一个分子量40000Ⅰ型跨膜糖蛋白，表达于多能干细胞，多数人胸腺细胞及外周血T淋巴细胞。抗体用于检测T细胞性白血病。单抗克隆为DK24，仅能用于涂片。
6 CD10 亦称普通急性淋巴母细胞性白血病抗原（CALLA），是分子量100000Ⅱ型跨膜糖蛋白，出现在早期B和T前体细胞，B母细胞和一些粒细胞。单抗克隆为SS2/36，为急性淋巴母细胞性白血病的特异性抗体，对大多数其他类型的白血病均呈阴性。抗体只能用于丙酮固定的涂片。
（四）髓系细胞
1 CD11b 即C3b受体，亦称Mo1或OKM1。单抗克隆为2LPM19c。出现于粒细胞分化的后期和单核系细胞。抗体与单核细胞性白血病反应，少数急性粒细胞白血病细胞亦起反应。
2 CD13 或称MY7，来自克隆WM47。亦即氨基肽酶N，为分子量150000Ⅱ型跨膜糖蛋白，出现在大多数髓系细胞，包括单核细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒及粒系白血病。
3 CD14 或称MY4，来自克隆TUK4，是一个分子量55000的膜糖蛋白，表达在单核细胞、巨噬细胞及一部分粒细胞。它是脂多糖受体，脂多糖激活它而使巨噬或单核细胞分泌细胞因子。
4 CD15 来自克隆C3D-1，亦称粒细胞相关抗原，抗体与LewisX单糖反应，后者出现在成熟粒细胞和R-S细胞。
5 CD33 亦称MY9，为分子量67000Ⅰ型跨膜糖蛋白，出现在骨髓粒和巨噬系的前体细胞，但多能干细胞却缺如。外周血单核细胞也表达。是一种涎酸依赖的细胞粘附分子。用以鉴别髓系和淋巴、红白血病。抗体来自克隆WM-54。
6 CD34 来自克隆QBEnd/10，亦称MY10，是分子量105000-120000跨膜糖蛋白，在造血祖细胞中表达，它的胞浆区是磷酸化的靶，在信号传递中起作用。
7 髓过氧化物酶（MPO） 单抗来自MPO7克隆。标记粒和单核细胞胞浆内的酶颗粒。但它与细胞化学显示的过氧化物的结果可不一致，因后者显示其功能，而单抗检测的是其抗原性，在肿瘤细胞中，二者可呈分离。
8 髓细胞/组织细胞抗原 单抗来自克隆MAC387，标记粒细胞及单核细胞。
9 中性粒细胞弹力酶 抗体来自克隆NP57，能与中性粒细胞及多数单核细胞起反应，可用于血、骨髓涂片及福尔马林固定的石蜡切片。
10 CD68 是一组酸性、溶酶体糖蛋白。它出现在胞浆内的颗粒，也可在巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞及大淋巴细胞表面检出，它具水解功能，是溶酶体膜的主要成分。单抗来自克隆EBM-11（仅能用于涂片）、KP1和PG-M1，PG-M1特异的针对单核和巨噬细胞，对粒细胞无反应。
（五）其他
1 巨核细胞标记抗体 CD42b为血小板糖蛋白Ⅰb、克隆为AN51。CD41为血小板糖蛋白Ⅱb，克隆为5B12，CD61为血小板糖蛋白Ⅲλ，克隆为Y2/51。
2 红系细胞标记抗体（GlycophorinA或C） 单抗分别来自克隆JC159和Ret40f，能与大部分红白血病细胞起反应
3 浆细胞标记抗体（CD38） 克隆为AT13/5，不单出现在浆细胞，早期B系及T系细胞和激活的B和T细胞均表达。90%CD34+细胞表达CD38。
另一个来自VS38c克隆的单抗，仅对浆细胞内糙面内质网相关的P63蛋白反应。还有CD138为分子量30500的细胞表面蛋白质，抗体来自克隆M1 15。
4 自然杀伤细胞抗体
（1）CD56：来自克隆MOC-1或T199；
（2）CD57：来自克隆HNK-1；
（3）CD94：来自克隆HP-3D9。
二、白血病的免疫分型
按照正常白细胞的发育、分化和成熟的过程，许多抗原在这个过程的不同时期中出现（表达）和消失。根据不同的抗原出现和消失，决定白细胞的分化阶段。在正常白细胞分化过程中，常规染色的形态，细胞化学的反应与表达的抗原是一致的。
白血病细胞是肿瘤性的增生，它的分化、成熟与正常的分化是有差异的，可称之为“歧途分化”。因此，在白血病细胞的形态、细胞化学反应的免疫表型可以是不一致的，或可称为是“分离”的。还有，肿瘤细胞由于有基因的突变、融合或插入等异常，因而肿瘤细胞可丧失其来源细胞的抗原簇，也可“获得”它原来没有（不表达）的抗原簇，而与相应的抗体反应，如白血病细胞表达上皮性抗原——角蛋白。
根据白血病细胞的免疫细胞化学反应，进行的分型即白血病的免疫分型，是白血病治疗、用药根据之一，是国际交流必不可少的检查之一。为此，开展免疫分型号已经是血细胞检查的常规方法。但是，各实验室还得根据实际情况选择适当的抗体。
（一）淋巴细胞性白血病
1急性淋巴细胞性白血病 相应的细胞发育阶段为淋巴母细胞，其免疫标记特点为TdT阳性，这是作为与髓系干细胞区别的要点（后者TdT阴性）。区别T系和B系的母细胞则依赖于HLA-DR（Ia）；B系阳性而T系阴性（注意：HLA-DR在髓系干细胞呈阳性）。其次CD19出现在早期B系细胞，也可作为区别T系和B系细胞的标志。CD7出现在早期T系细胞，它虽不存在于B系细胞，但一部分急性非淋巴白血病细胞亦可表达，需加注意，因此须与其他抗体同时应用，综合考虑。
2慢性淋巴细胞性白血病 经典的慢性淋巴细胞白血病多数是B系细胞，瘤细胞有B系相关抗原（CD19、CD20、CD79α）。表达CD5+、CD23+、CD43+；CD11c+/-；但CD10阴性。少数为T系细胞，表达CD7+和其他T细胞相关抗原（CD2，3，5阳性）；多数CD4+，有些CD4、CD8均阳性，极少数CD4、CD8均阴性，而CD25阴性。
3非典型慢性淋巴细胞白血病及淋巴瘤并发白血病 慢性淋巴细胞性白血病的特征标志是CD5+和CD23+，若这二者均阴性，则为非典型慢性淋巴细胞白血病。其中主要的是前B细胞性白血病。淋巴瘤并发白血病者，瘤细胞的免疫表型与原发灶中的基本相同。
4多毛细胞性白血病 瘤细胞的免疫表型为sIg+、B细胞相关抗原（CD19、CD20、CD22、CD79α）阳性；CD5、CD10、CD23均阴性，CD11c和CD25强阳性，FMC7和CD103阳性，这个标志的阳性意义最大，但前三者亦可出现在多毛细胞白血病之外的情况。
5浆细胞性白血病 多数sIg阴性而cIg阳性，B细胞相关抗原多数阴性，但CD79α可呈阳性。浆细胞特异性抗体和CD38阳性。
6大颗粒淋巴细胞性白血病（T细胞或NK细胞） 两种白血病细胞的免疫表型分别为：T细胞型：CD2+、CD3+、CD5+、CD7+、TcRαβ+、CD4-、CD8+、CD16+、CD56-、CD57+/-、CD25-；NK细胞型：CD2+、CD3-、TcRαβ-、CD4-、CD8+/-、CD16+、CD56+/-、CD57+/-。
（二）非淋巴细胞性白血病
髓系细胞抗体反应与急性非淋巴细胞性白血病M1-M7之间的关系如下表：
表4-1 急性非淋巴细胞白血病免疫分型
抗体
M1
M2
M4
M5
M3
M6
M7
HLA-DR
+
+
+
+
-
+/-
+/-
CD34
+
+/-
+/-
+/-
-
-
+/-
CD33
+
+
+
+
+
+/-
+/-
CD13
+/-
+
+
+
+
-
无报道
CD11
-
+
+
+
+/-
-
无报道
CD15
-
+
+
+
+/-
+/-
无报道
CD14
-
+/-
+
+
-
-
无报道
血型糖蛋白
-
-
-
-
-
+
-
血小板GPⅡb/Ⅲa/Ⅰb
-
-
-
-
-
-
+
急性早幼粒细胞白血病细胞与PML抗体反应。
慢性粒细胞性白血病，一般表示髓系标记抗原MY9（CD33），还可表示ABL/BCR融合基因产生的蛋白质抗原。
（三）双系和双表型白血病
白血病同时有淋系和髓系标记抗原的瘤细胞为双系型白血病。
同一个白血病细胞表达淋系和髓系抗原者称为双表型白血病。目前“确认”的系限表达标志（lineage-restricted markers）为：（1）粒系：过氧化物酶、CD34、CD13；（2）单核系CD34、CD13、CD14；（3）红系：血型糖蛋白；（4）巨核系：血小板糖蛋白；（5）B细胞系：表面或胞浆免疫球蛋白，CD19、CD20；（6）T细胞系：CD5、CD3、CD2、CD7。CD57常在慢性B淋巴细胞白血病表达，不认为双表达。CD2和CD7在少数急性非淋巴细胞白血病细胞中表达亦不认为是双表达。
此外，还有一种在白血病治疗和病程进展过程中，白血病细胞免疫表型发生转变，称为细胞系转变型。
