高速逆流色谱分离纯化钩吻中钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱
摘 要:目的 建立高速逆流色谱技术分离纯化钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱的方法。方法 采用高速逆流色谱分离技术分离纯化钩吻生物碱单体,以氯仿-甲醇-0.1 mol/ L HCl (4 ∶4 ∶2) 为溶剂体系;高效液相色谱技术分析所提产物的质量分数;核磁共振谱、质谱分析确证单体的化学结构。结果 从300 mg 钩吻总碱中经过一次高速逆流色谱技术分离纯化获得19.4 mg 钩吻素己和21.2 mg 1-甲氧基钩吻碱,质量分数分别为95.4 %、98.6 %;经过电喷雾质谱及核磁共振的结构鉴定分析,证实分离得到的两种生物碱分别是钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱。结论 高速逆流色谱技术可高效分离纯化钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱,为钩吻生物碱的研发提供了制备技术。
钩吻为马钱科钩吻属植物钩吻Gelsemium elegans( Gardn1 et Champ1 ) Benth1 全草,盛产于闽、粤、桂等地,具有广泛的临床药用价值,但因其毒性大一直以外用治疗为主。钩吻的主要有效成分为吲哚类生物碱。钩吻总生物碱具有显著的抗肿瘤、镇静、镇痛、促进造血、抑制血小板聚集、免疫抑制等作用[1 ,2 ] ,但其有效量与中毒量较为接近,限制了临床应用。钩吻素己(图12A) 为钩吻生物碱中毒性最强的单体[ 3 ] 。1-甲氧基钩吻碱(图12B) 为甲氧基取代钩吻素甲,其药理作用未见文献报道。用于分离纯化钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱的传统方法为碱性硅胶柱或氧化铝柱色谱法[3 ] ,但是此方法分离周期长,溶剂消耗大, 得率低。高速逆流色谱( high-
speed counter current chromatograp hy ,HSCCC) 是一种基于液2液分配机制的新型色谱分离纯化技术,可避免液固色谱造成的固体载体对样品的不可逆吸附,分离效率高,回收率高,制备量大[4 ] 。本实验采用HSCCC 技术分离纯化钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱,旨在为钩吻生物碱单体的研发提供一种高效分离纯化制备技术。
图1 钩吻素己( A) 和12甲氧基钩吻碱( B) 的化学结构
Fig11 Chemical structures of gelsenicine ( A)and gelsevirine ( B)
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