细菌透射电镜样品制备实验——滴液法＋负染法
透射电镜样品的制备方法很多。其中滴液法，或在滴液法基础上发展出来的其他类似方法如直接贴印法、喷雾法等主要被用于观察病毒粒子细菌的形态及生物大分子等。由于生物样品散射电子的能力很低，所以通常还须采用重金属盐染色或金属喷镀等方法来增加样品的反差，提高观察效果。负染色法由于操作简单，目前在进行透射电镜生物样品制片时比较常用。
本实验将主要介绍采用滴液法结合负染色技术观察细菌的形态。
| 实验方法原理 | 由于生物样品主要由碳、氢、氧、氮等元素组成，散射电子的能力很低，在电镜下反差小。所以在进行电镜的生物样品制备时通常还须采用重金属盐染色或金属喷镀等方法来增加样品的反差，提高观察效果。负染色法就是用电子密度高，本身不显示结构且与样品几乎不反应的物质（如磷钨酸钠或磷钨酸钾）来对样品进行「染色」， 由于这些重金属盐不被样品成分所吸附而是沉积到样品四周，如果样品具有表面结构，这种物质还能穿透进表面上凹陷的部分，因面在样品四周有染液沉积的地方，散射电于的能力强，表现为暗区，而在有样品的地方散射电子的能力弱，表现为亮区。这样便能把样品的外形与表面结构清楚地衬托出来。负染色法由于操作简单，目前在进行透射电镜生物样品制片时比较常用。 |
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 将适量无菌水加入生长良好的细菌斜面内，用吸管轻轻拨动菌体制成菌悬液参用无菌滤纸过滤，并调整滤液中的细胞浓度为 108～109 个/毫升。 2. 取等量的上述菌悬液与等量的 2％ 的磷钨酸钠水溶液混合，制成混合菌悬液。 3. 用无菌毛细吸管吸取混合菌悬液滴在铜网膜上。 4. 经 3～5 min 后，用滤纸吸去余水，待样品干燥后，置低倍光学显微镜下检查，挑选膜完整、菌体分布均匀的铜网。 有时为了保持菌体的原有形状，常用戊二醛、甲醛、锇酸蒸气等试剂小心固定后再进行染色。（见「辅助方案 固定」） |
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