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染色体G带技术

2019.4.28

也称为G显带,是最常用的显带方法,具有操作简便、经济及标本能长期保存等优点。
1、Giemsa原液的配制:
  (1)称3.75gGiemsa粉置研磨器中,加少许丙三醇研磨,研磨越细越好;
  (2)将研细的Giemsa加丙三醇移入500ml棕色瓶内,丙三醇的总量为250ml,用一定量甲醇洗干净研磨器。
  (3)摇匀,置60℃水浴锅24小时或37℃温箱72小时,经常摇动。
  (4)取出冷却后,加甲醇总量至250ml混匀,密封棕色瓶备用。贮藏时间越长,染色效果越好。
2、实验材料:
  中期染色体标本;
  0.9%氯化钠注射水;
  3%tris液体;
  0.25%胰蛋白酶;
  Gremsa染色液;
  蒸馏水;
  水浴锅;
  立式染缸;
  定时器或时针;
  温度计;
  镊子及纱布;
  刻字笔;
3、操作程序:
  (1)消化液配制:取0.9%氯化钠注射水100ml,加0.25%胰蛋白酶1ml,制成0.025%胰蛋白酶盐水消化液,加4-5滴tris液调PH6.8左右,移消化液于立式染色缸并置37℃水浴锅中备用;
  (2)染液配制:取立式染缸,加蒸馏水500ml,加3滴tris液调PH并加入Giemea染液1ml左右,用吸管调匀备用; 
  (3)漂洗液:取立式染缸一个,内加蒸馏水备用;
  (4)试消化:待消化液温度在37℃左右时,取同批标本较多者标本1张,分二节或三节进行消化,每节相差十五秒左右,从45秒或60秒开始增减。取出后先在纱布或吸水纸上直立除去带出胰蛋白酶,后置蒸馏水染缸内漂洗,取出后,标本斜面朝上,刮去染色缸内染液上浮膜,沿槽插入,每分钟移动1次,染色3-5分钟。
  (5)洗片:从染色缸中取出标本玻片,自来水冲洗,取刻编号面朝上用纱布干净玻片背部染色,稍干,高倍镜下观片,确定分带与染色时间。
  (6)分带:取4张待分带标本玻片,细胞面朝左侧按顺序插入37℃的消化液中,消化时间较试消化选择时间延长5-10秒钟,取出每片间隔时间约10秒钟左右。
  (7)消化及染色调整:每次消化完一批标本后,需加入配好的消化液25ml于消化缸中,下次消化时间不变。同样,每次染色一批标本后加Giemsa染色液2-3滴,调匀,每次染色时间不变;
  (8)Giemsa染色调整:若Giemsa染色标本偏红,说明染色液偏酸,可加tris数滴调蓝,若Gremsa染色标本偏蓝则说明tris加多了;
  (9)保存:将分好带的及观察中的标本及时收集于玻片盒内保存,防止细胞涂面灰尘污染及擦损。
  注意:Giemsa消化染色过程中,有两个重要的环节,一是胰酶消化环节,消化不足带不出现,消化过度染色体变得膨胀和不着色,必须把握好胰酶浓度、消化时间和消化温度;二是预处理或老化环节,对消化和带型清晰度有很大影响,其中80℃2小时热处理,是简便易行和效果较好的办法。

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