测定氨基糖苷类抗生素的残留量实验
HPLC-MS/MS法
| 实验材料 | 动物组织 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 磷酸盐缓冲液 乙酸 甲醇 |
| 仪器、耗材 | SPE柱 离心管 |
| 实验步骤 |
1. 前处理
称取2 g样品于50 mL聚丙烯离心管，加入3 mL磷酸盐缓冲液（10 mmol/L KH2PO4含0.4 mmol/LEDTA和2%三氯乙酸），均质（30～60 s）。塞紧，激烈振荡l0 min。在4000 r/min下离心10 min。将上清液转入另一离心管，残渣中加入10 mL磷酸盐缓冲液/TAC，混合，激烈振荡l0 min。离心，合并上清液。将合并的上清液用30%NaOH调节pH至7.5～8.0。离心，如需要可用角匙去掉上面的脂肪。
SPE（BakerBondSPEWidePoreCB，500 mg）柱净化：将SPE柱装好后，用 5 mLMeOH和5 mL水淋洗。加入样品使流速为1～3 mL/min，用4～5 mL水淋 柱，抽干5 min。氨基糖苷类抗生素用3 mLl0%乙酸/甲醇洗脱1l5 mL玻璃离心管。在40 ℃下用氮气浓缩至约0.1 mL，在室温下用氮气吹干。加入0.4 mL5 mmol/L HFBA，混合后超声15 min，在2500 r/min下离心10 min，转入另一0.6 mL聚丙烯离心管，在16000 r/min下离心10 min。小心移出大约一半上清液自动进样瓶。
2. 仪器条件
色谱柱：内径为2.1mm，长100mm的反相C18，3.5um粒径；
流动相：流速0.15 mL/mm，初始5%MeOH，75%水，20%100 mmol/LHFBA。
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