数字PCR之Evagreen染料法（二）
6.2阈值设置
通常，阈值是由分析软件自动设置，阈值以上的分区为正，阈值以下的分区为负。因此，设置阈值是数字PCR对定量结果进行处理的一个强制性步骤。由于阈值设置是自动计算，我们建议您查看点一维图。但是，下面两种情况需要手动设置阈值：
●当有非常少的正分区或非常少的负分区时；
●当你观察到正负分区之间有很多雨滴时。
6.3浓度计算
设置阈值后，软件自动量化每个目标的正分区和负分区的数量。然后，使用泊松分布将这个数字读数转换为拷贝数。每个结果都有一个95%的置信区间，它反映了测量的精度。该方法的精度也可由“95%置信区间”值给出，越小越好!每个样本浓度的95%置信区间及其相关的相对不确定度由分析软件自动计算。如图：
Evagreen数字PCR实验具有设计简单、条件建立快而且成本低等优点，但是 由于DNA结合Evagreen为非特异性结合双链DNA，所以Evagreen方法多用于低通量、单重实验。
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