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StrataQuest定量分析方法:探索胞内原生生物与宿主细胞...3

2020.5.25

体外原位成活与失活胞内病原体的诊断

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此图为体外活细胞和死细胞的定量分析。因为失活病原体不能够吸收DAPI,所以软件能够做出宿主细胞中病原体的区别。对样本进行EB-AO平行染色。StrataQuest识别细胞的胞质(绿色部分),细胞与细胞接触部分(橘色)。

(A)AO灰阶图用于薄膜的检测(绿色部分),细胞边缘的确定(橘色部分)。(B)对粘连细胞进行详细分析。(C)反向回溯确定巨噬细胞拥有多于2个失活寄生虫。(E)拥有失活寄生虫的巨噬细胞的频率分析。(F)拥有不同数量失活寄生虫的吞噬细胞的频率分析。

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冰冻切片利用DAPI染色然后TissueQuest进行分析。DAPI的信号指出病原体的DNA并未退化。活检,活检,干燥前的病原体仍然具有活性。StrataQuest软件创建胞核(橘色)和核膜(绿色)。因此,DAPI阳性病原能够在宿主细胞的胞浆部分进行识别。

此图为寄生负载的评估。(A)被感染的淋巴腺。灰阶图为DAPI+宿主细胞核和寄生虫DNA。(B)胞核,胞浆和寄生虫的重叠影像(C)(D)反向回溯拥有3和5-10寄生虫的细胞(E)感染细胞的寄生负载。

此实验中,TissueQuest和StrataQuest软件能够检测如下特点:

1) 寄生负担

2) 感染细胞的表型

3) 定位

4) 细胞-细胞联系

后续研究中会着重在宿主-寄生虫的联系的分子反应机理,在微生物方向疾病治愈做出提高。


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