聚酰胺部分水解后固定化酶到羧基实验
实验方法原理
自由氨基的封闭是通过在冰浴的 1%(质量浓度)亚硝酸钠的 0.5 mol/L 盐酸溶液中处理后,进一步在 40℃ 的该溶液中孵化 20 min 来实现的。
实验材料 酶溶液
试剂、试剂盒 盐酸己二胺二环己基碳二亚胺磷酸钾NaCl
实验步骤
1. 自由竣基的活化
聚酰胺小片在溶有 10 g/l 己二胺和 10 g/l 二环己基碳二亚胺的二氯甲醇溶液中于 10℃ 孵化 4 h。用二氯甲醇、丙酮和冰水各 10 ml 冲洗,除去自由乙二胺
在 10 ml 溶有 10 g/l 亚硝酸钠的 0.5 mol/L 盐酸中,0℃ 孵化 20 min 实现活化。其后,聚酰胺小片用 10 ml 冰的 1 mmol/L 盐酸冲洗。
2. 酶结合到有活性的聚酰胺上并储存
在冲洗聚酰胺小片之后,马上添加酶溶液(0.2~0.5 mg/ml 溶于 0.1 mol/L pH 7.5 的磷酸钾,小片必须完全沉浸在溶液中)在 4℃ 孵化 3 h。在玻璃料上用溶有 0.5 mol/L NaCl 的 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸钾冲洗,除掉没有被固定的酶。其后,用 0.1 mol/L pH 7.5 的磷酸钾冲洗来降低髙盐的浓度。如果短期储存,固定了酶的小片保存在 4℃ pH 7.5 的 0.1 mol/L 磷酸钾中。如果长期储存,这些小片迅速用水冲和用空气干燥(这个过程对于很敏感的酶是不能承受的)
注意事项
其他
1. 材料
酶溶液(0.5 mg/ml 溶于 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸钾中)
2. 耗材
0.5 mol/L 盐酸
己二胺
二环己基碳二亚胺
准备己二胺、二环己基碳二亚胺溶液,都是二氯甲醇中含 1%(质量浓度)
0.1 mol/L pH 7.5 磷酸钾
0.5 mol/L NaCl 溶于 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸钾中