分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

EB病毒抗体血清学检测是早期诊断鼻咽癌的首要选择

2021.5.15

1967年Helen等在鼻咽癌病人的血清中发现EB病毒特异性的IgA抗体，鼻咽癌患者血清中经常存在高滴度的抗EB病毒多种抗原的特异性抗体谱。大量的研究证明，侵入人体鼻咽部上皮细胞的EB病毒是诱发鼻咽部细胞分裂、癌变的病理主因，在不同的感染阶段表达出的蛋白抗原主要有潜伏期的膜抗原 (MA)家族和核抗原(NA)家族；裂解期的立即早期抗原（immediate early antigen），迄今被发现的有Rta和Zta；早期抗原（early antigen, EA）；以及EB病毒复制重组过程所表达出的病毒衣壳抗原(virus capsid antigen)等等。这些抗原在EB病毒感染的不同阶段激活人体淋巴免疫系统产生针对这些抗原的IgA、IgG、IgM抗体，分布于血液之中。

使用抗原抗体免疫反应技术设计制作出EB病毒抗体检测试剂盒，用来检测血液中是否存在某种或某些EB病毒抗体及其滴度，来推测人体感染EB病毒的状态和程度，对诊断EB病毒相关疾病的发生发展甚至预后具有十分重要的意义。

检测鼻咽癌相关抗体指标的血清学诊断方法目前已经成为鼻咽癌早期诊断的主要工具，该类方法只需取几毫升静脉血使用相应的试剂盒就可检测，检测结果由专门的仪器收集分析，具有创伤小、成本低、检测速度快、结果报告客观等优点，适用于鼻咽癌各个层次检测的需求，可以进入常规健康体检、高危人群筛查、门诊临床检验辅助诊断以及用于已确诊鼻咽癌患者的治疗效果监测。

20世纪70年代初我国就开始研究EB病毒的血清学诊断方法，免疫荧光技术、免疫酶法涂片、酶联免疫方法相继建立。曾毅等在我国华南地区开展的大规模血清学调查，发现EBV-CA （Capsid Antigen,CA,衣壳抗原）和EA（Early Antigen, EA,早期抗原）的抗体反应，在鼻咽癌的临床诊断和疗效判断上均有重要意义。然而免疫荧光和免疫酶法是以带有EB病毒基因组的淋巴母细胞株B95-8细胞或Raji 细胞涂片检查人血清中针对病毒衣壳抗原和早期抗原的IgA抗体的检测方法。这两种方法以固定细胞作为抗原的来源，在显微镜下逐一判断结果，方法繁琐，而且在EB病毒基因组的细胞中存在多种特异的或非特异的抗原成分，在结果的判定上，带有一定的主观性，影响了检测方法的特异性和敏感性。而且，检测这两种抗体的方法是间接荧光免疫法，操作复杂，技术要求高，需要用荧光显微镜这样昂贵的仪器，所以很难普及，因此研制一种更准确、敏感、快速、简易的鼻咽癌诊断、筛查方法将是当今该类技术的发展趋势。

近年来，很多学者试探建立了ELISA检测人血清中对EB病毒相关抗原的抗体，较细胞涂片方法简单、敏感。

自从1971年Engvall和Perlman首次报道建立酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）以来，由于ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点，使其得到迅速的发展和广泛应用。ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。根据待测样品与键结机制的不同，ELISA可设计出各种不同类型的检测方式，主要以三明治法（sandwich）、间接法（indirect）、以及竞争法（Competitive）三种为主：三明治法常用于检测大分子抗原，间接法常用于检测抗体，竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原。EB病毒基因表达的蛋白比较复杂，EB病毒感染人体细胞之后，依照不同的感染阶段和感染状态不同的基因组表达出不同的蛋白，其中具有较强抗原性的蛋白会刺激人体免疫系统产生相应的抗体。使用简接ELISA技术检测受检者血液中EB病毒抗体，就能推测出EB病毒在人体内感染的状况、阶段甚至严重程度。

衣壳抗原（CA）血清抗体、早期抗原（EA）血清抗体、核抗原1(NA-1) 血清抗体用于EB病毒感染的检测已经多年了，在中国用于鼻咽癌的检测也已有多年的历史。

EBV衣壳抗原(CA)是研究和应用得最广泛的一种EBV抗原，目前应用最多的是EB病毒抗CA抗体。IgA／VCA单独检测虽然有较好的敏感性(76.3％)，但其在健康人群里10％左右的检出率提示特异性较差，对鼻咽癌诊断还存在明显不足。

近年应用于临床检测的EBV相关核抗原1(NA-l)是一种特殊的病毒蛋白，为潜伏期EBV DNA复制和细胞转化所必需，它能够在NPC组织活检的上皮细胞中持续表达并在所有EBV相关肿瘤中都能表达，在潜伏期的检出率最高。临床试验表明，NA-l作检测抗原具有良好的特异性(87.93％)，但灵敏度较低(56.8％)，容易出现漏检情况。

EBV早期抗原(EA)由EA-D(弥散型EA)和EA-R(局限型)组成的复合物。在鼻咽癌患者血清中EA抗原类抗体主要于D型抗原发生特异性反应，检测其IgA抗体具有较高特异性，但灵敏度较差。

EBV裂解期立早基因编码Rta蛋白是近十年来新发现的最受关注的新分子靶标，血液检测Rta蛋白抗体在鼻咽癌筛查和早期诊断中有非常高的临床诊断价值。

互联网

喜欢作者我要约稿