多重PCR中的常见问题--出现非特异产物如何处理?
①若非特异产物是长片段,增加缓冲液浓度至1.4×~2.0×;
②若是短片段,降低缓冲液浓度至0.7×~0.9×;
③逐渐增加退火温度;
④减少模板和聚合酶的用量;
⑤增加Mg2至3mmol/L、6mmol/L、9mmol/L、12mmol/L-,同时保持dNTP浓度恒定在200umol/L: ⑥同时应用以上5种策略
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①若非特异产物是长片段,增加缓冲液浓度至1.4×~2.0×;
②若是短片段,降低缓冲液浓度至0.7×~0.9×;
③逐渐增加退火温度;
④减少模板和聚合酶的用量;
⑤增加Mg2至3mmol/L、6mmol/L、9mmol/L、12mmol/L-,同时保持dNTP浓度恒定在200umol/L: ⑥同时应用以上5种策略