抑肽酶的效价测定方法
底物溶液取N-苯甲酰-L精氨酸乙酯盐酸盐171.3mg,加水溶解并稀释至25ml。临用新制。胰蛋白酶溶液取胰蛋白酶对照品适量,精密称定,加盐酸滴定液(0.01mol/L)溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.8单位(每1ml中约含1mg)的溶液,临用新制并置冰浴中。胰蛋白酶稀释液精密量取胰蛋白酶溶液1ml,置20n量瓶中,用硼砂氯化钙缓冲液(pH8.0)稀释至刻度,摇匀,放置10分钟,置冰浴中供试品溶液取本品适量,精密称定,加硼砂氯化钙缓冲液(pH8.0)溶解并定量稀释制成每1ml中约含1.67单位(每lml中约含o.6mg)的溶液,精密量取0.5ml与胰蛋白酶溶液2ml,置2oml量瓶中,再用硼砂氯化钙缓冲液(pH8.0)稀释至刻度,摇匀,反应10分钟,置冰浴中(2小时内使用测定法取硼砂氯化钙缓冲液(pH8.0)9.0ml与底物溶液1.0m,置25ml烧杯中,于25℃±0.5℃恒温水浴中放置3~5分钟,在搅拌下滴加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)调节pH值至8.0,精密加入供试品溶液(经25℃保温3~5分钟)1ml,并立即计时,用1ml微量滴定管以氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定释放出的酸,使溶液的pH值始终保持在7.9~8.1。每隔60秒读取pH值恰为8.0时所消耗的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)的体积(ml),共6分钟。另精密量取胰蛋白酶稀释液1ml,按上法操作,作为对照(重复一次)。以时间为横坐标,消耗的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)为纵坐标作图,应为一条直线。供试品和对照两条直线应基本重合,求出每秒钟消耗氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)的体积(m1),按下式计算。(2n1-n2)4000·f每1mg抑肽酶的效价(单位)式中4000为系数;W为抑肽酶制成每1ml中约含1.67单位时的酶n1为对照测定时每秒钟消耗的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)的体积,mln2为供试品溶液每秒钟消耗氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)的体积,ml;2为供试品溶液中所加入胰蛋白酶的量为对照测定时的2倍;f为氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)校正因子。效价单位定义能抑制一个胰蛋白酶单位[每秒钟能水解1mol的N-苯甲酰-L精氨酸乙酯(BAEE)为一个胰蛋白酶单位( microkatal)]的活力称为一个抑肽酶活力单位(EPU)。每1EPU的抑肽酶相当于1800KIU抑肽酶活性是测定对已知活性的胰蛋白酶的抑制作用。用胰蛋白酶原有活性与残存活性间的差值计算活力单位。
