专家经验谈：抗体制备法的利与弊
单克隆抗体一直是基础研究、医学诊断和疾病治疗中的重要工具。制备单克隆抗体的传统方法，是诺贝尔奖获得者Georges Köhler和César Milstein在上世纪七十年代开发出来的。这一方法包括：让小鼠接触特定抗原，收集它体内的抗体生产细胞，然后将这些细胞与骨髓瘤细胞融合，形成能够长时间体外培养的杂交瘤。这种技术可以帮助人们生产大量高度特异性的抗体。
然而，动物源的抗体不能用于人体治疗，因为它们会触发人体的免疫反应。为了在人体免疫细胞应答特定病原体时，获取细胞产生的抗体，科学家们又开发了一些新的方法。例如，从血样中分离记忆性B细胞，然后利用Epstein-Barr感染使这些细胞具有永生能力，再在其中筛选能够生成特异性抗体的细胞。“这个方法非常费劲，因为你要制备这些细胞系，对大量的细胞进行筛选，”芝加哥大学的免疫学副教授Patrick Wilson说。另外，不是所有的细胞都能在永生化过程中存活下来，这无疑限制了天然抗体的产量。
最近Wilson等人找到了一个新办法，他们从活跃应答病原体或疫苗的人类血液中，分离具有抗原特异性的单个B细胞，然后对细胞中编码抗体重链和轻链的两个基因进行克隆。这些基因的序列在不同细胞中是有差异的，“不能把细胞混在一起，因为那样你可能得到一个细胞的重链和另一个细胞的轻链”，这样就不能获得天然的重轻链组合。克隆了两个基因之后，就可以在此基础上生产重组抗体，这一技术也被称为表达克隆（expression cloning）。“这个技术没什么限制，只要分离到B细胞就可以制造相应的抗体，”Wilson说。“问题在于实验的步骤比较繁琐。”
表达克隆法最适合“在获得了大量抗原特异性细胞时使用，而这些细胞只有在疫苗接种或感染之后才会出现，”Wilson说。如果没有产生活跃的免疫应答，这个技术鉴定抗体就会非常吃力。因为血液中存在着数百万记忆性B细胞，它们都针对着不同的抗原。
上述技术都是鉴定新抗体和研究人类免疫应答的宝贵工具，不过这些技术都很耗时也比较复杂。为了加快抗体研发的速度，The Scientist杂志联系了相关领域的一些专家，请他们分享了自己使用新兴技术进行抗体鉴定和分离的经验。
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