酵母遗传学方法8：酵母活体染色
酵母活体染色
1）核DNA和线粒体DNA
1．当细胞培养到约107细胞/ml时，离心（5秒）收集细胞，再悬浮在70％乙醇中。
2．固定5分钟或5分钟以上，用水洗2次。
3．将细胞悬浮在含有50ng/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚的封固剂中。1mg/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚母液可在－20℃下贮存。
4．用紫外滤片观察。
2）线粒体
1．在生长培养基中培养细胞达到约107细胞/ml时，加入100ng/ml 3，3’-二已基噁羰花青碘化物（DiOC6，Sigma D3652或Molecular Probes）用乙醇把1mg/ml母液稀释到1/104。
2．培养5分钟或5分钟以上，用荧光素滤片观察。
3）液泡
1．当细胞生长到约107细胞/ml时，离心收集细胞（5秒），悬浮在含有50mmol/L柠檬酸钠（pH4.0）的YPD中。
2．加CDCFDA（羧基-2’,7’-二氯-荧光素双乙酸盐）到终浓度为10μmol/L。
3．保温10分钟或10分钟以上，用荧光滤片观察。
4）牙痕和几丁质
1．用生长培养基培养细胞达107细胞/ml时，加100μg/ml Calcofluor（荧光发光剂28；Sigma F3543）（用水将1mg/ml母液稀释到1/10，母液可在－20℃下黑暗保存数星期）。
2．培养5分钟或5分钟以上，用水洗2次，用紫外滤片观察。
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