什么是酵母双杂？
酵母双杂交技术，它是通过利用转录激活因子GAL4的特性而建立的。GAL4由两个结构域组成，一个为N端的DNA结合域（DNAbinding domain，DBD），另一个是C端的转录激活域（active domain，AD），二者可以从核酸一级结构上分开而独立表达出有功能的结构域；当二者在物理空间上靠近时可以表现出完整的转录因子的活性，和自然表达转录激活因子GAL4一样，可结合其顺式元件UASG并激活下游的半乳糖苷酶基因转录。因此，如果用目的蛋白A的核酸序列同DNA结合域的核酸序列融合表达表达DBD-A，用目的蛋白B的核酸序列同转录激活域的核酸序列融合表达AD-B, 如果A和B两个蛋白能够相互作用，则DNA结合域（DBD）和转录激活域（AD）在物理空间可以靠近，这时就能够表现出完整的转录激活因子的功能，从而激活其下游基因的表达。因此，检测GAL4调控的半乳糖苷酶的活性就可判断A、B两个蛋白是否可以相互作用。
就这么说吧，首先，你把目的基因构建到DNA结合质粒（BD质粒）中，并转入到a型酵母（如Y187）中形成钓饵（Bait）；其次将全cDNA片段构建的转录激活质粒（AD质粒）转化到b型酵母（如AH109）中，那么每个b型酵母含有一个随机的AD质粒，就形成了酵母库；最后将两种菌共培养，就会发生异型细胞的融合使得AD和BD两个质粒同时进入到一个酵母细胞中，当目的蛋白和酵母库中AD质粒所表达的蛋白互作时，质粒上的氨基酸合成基因就会被启动激活，使得酵母可以在营养缺陷型的培养基上生长了。
酵母双杂文库筛选步骤
（1）挑取转有重组质粒的AH109单菌落接种于含5ml 2xYPDA液体的试管中，28℃ 220rpm 48h（菌液的浓度达到1ｘ109cell/mL）；
（2）从-70 ℃超低温冰箱中取出Y187的cDNA文库（细胞数达到2ｘ107cell/mL）在水中室温解冻；
（3）把5 mL转有诱饵基因的AH109菌液和1mL拟南芥cDNA文库（Y87）合并在一个2L的锥形瓶中，并加入45 mL的2ｘYPAD，卡纳终浓度50 μg/mL；
（4）用1 mL的2ｘYPAD溶液（卡纳终浓度50 μg/mL）涮洗装文库的离心管，合并到一起
（5）在30 ℃摇床中40 rpm缓慢摇动20-24 h；
（6）20 h后，在400倍显微镜下观察细胞，如果细胞融合的很好，则进行下一步实验，否则继续摇床中培养4 h；
（7）用1个灭菌的50 mL离心管收集菌液，另找一个离心管配平，1000 g离心10min，弃上清；
（8）用50 mL的0.5ｘYPDA溶液（卡纳终浓度50 μg/mL）涮洗锥形瓶2次，把溶液混在一起，1000 g离心10 min，弃上清；
（9）用10 mL的0.5ｘYPDA溶液（卡纳终浓度50 μg/mL）重悬菌体，涂布在SD/-Trp-Leu-His平板上（培养皿规格150 mm），每个皿200 μL；
（10）30℃培养箱中倒置培养。
（11）待菌落长出后，再转移到SD/-Trp-Leu-His-Ade平板上
（12）30℃培养箱中倒置培养。
主要应用：
（1）发现新的蛋白质和蛋白质的新功能；也可作为研究已知基因的新功能或多个筛选到的已知基因之间功能相关；
（2）在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用；
（3）筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间相互的影响；
（4）分析新基因的生物学功能。
（5）检验一对功能已知蛋白间的相互作用，研究一对蛋白间发生相互作用所必需的结构域。
（6）用已知功能的蛋白基因筛选双杂交cDNA文库，以研究蛋白质之间相互作用的传递途径。
（7）建立基因组蛋白连锁图。
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