乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理 |
乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化氮唑蓝(INT)或硝基氯化四氮唑蓝(NBT)形成有色的甲簪类化合物,在490nm或570nm波长处有一高吸收峰,利用读取的OD值,经过计算即可得NK细胞活性
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实验步骤 |
1.靶细胞制备
2.效应细胞的制备
3.效-靶细胞作用
4.酶促反应
5.结果计算
NK细胞活性(%)=■×100%
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