微生物拟核体内体外染色观察实验_富尔根氏染色法
| 实验方法原理 | 富尔根氏（Feulgen）染色法是根据席夫氏（Schiff）试剂进行的反应而建立的微生物拟核染色法。席夫氏试剂含有碱性复红和亚硫酸，碱性复红与亚硫酸结合后，失去醌式结构而变为无色。当 DNA 经酸作用而生成的醛化合物与席夫氏试剂结合后，使醌式结构恢复，合成一种带紫红色的碱性复红衍生物。此染色法对 DNA 具有特异性。微生物细胞用此法染色后，可在普通光学显微镜下原位观察到细胞内拟核的形态和位置。 富尔根氏染色法主要分两步： 1. 将细胞用 1 mol/L HCI 温和水解，使 DNA 中的嘌呤碱与戊糖分开，放出戊糖的醛基； 2. 放出的戊糖醛基与席夫氏试剂作用后呈紫红色。 |
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1 取培养 8～10 h 的酿酒酵母涂片，室温下风干。 2. 将涂片置于盛有 2% 锇酸的蒸气瓶口上，用锇酸蒸气固定 5 min，然后放入加热至 60 ℃ 的 Schandium 固定液中 10 min。 3. 用水冲洗固定后的标本，然后放在 60 ℃ 1 mol/L HCl 中水解 8 min，水洗。 4. 用席夫氏试剂作用 30～40 min。 5. 由席夫氏试剂中取出放在亚硫酸水溶液中洗 5 min。 6. 由亚硫酸水溶液中取出水洗，干燥后，用油镜观察。 |
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