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分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

酵母总RNA的制备

2019.9.12

           

试剂、试剂盒

AE 缓冲液。   苯酚 10%SDS  酚  氯仿   无水乙醇 乙醇.  3mol L 乙酸钠  无 RNase 的水

仪器、耗材

髙速离心机

实验步骤

一 材料与设备

1)AE 缓冲液：50 mmol/L 乙酸钠 (PH5.3)，lOmmol/LEDTA。

2) 苯酚 (用 AE 缓冲液预先平衡）。

3)10%SDS

4) 酚：氯仿（1:1)。

5) 氯仿

6) 无水乙醇及 80% 乙醇.

7)3mol/L 乙酸钠

8) 无 RNase 的水

9) 髙速离心机。


二 操作方法

1) 离心收集 l0 ml 酵母细胞培养物，用 40ulAE 缓冲液重悬。转移到 1.5 ml 离心管中。

2) 加入 40ul10%SDS，混匀，再加入等体积 (440u1) 苯酚，涡旋混匀。

3)65°C 温育 4mim, 干冰/乙醇浴迅速冷却直至出现苯酚结晶，最大转速离心 2 min,. 上清转移到一新管中。

4）加入等体积酚：氯仿抽提，离心 5 min, 上清转移到新管中，加入 0.1 倍体积的 3mol/L 乙酸钠（pH5.3) 及倍体积无水乙醇，一 20℃ 沉淀 30 min。

5) 以 12000 g，于 4℃ 离心 lOmin, 冉以 lml80% 乙醇漂洗沉淀。干燥后，RNA 溶于 20ul 无 RNase 的水中, 于-70℃ 保存。

            展开           
注意事项

用 PH 8. 0 的 Tris-Cl 平衡的苯酚代替 AE 平衡酚也可取得良好的效果。


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