聚乙二醇沉淀法检测循环免疫复合物
实验概要
免疫复合物存在的形式有三种，一是大的免疫复合物(大于19S)，可被单核巨噬细胞系统吞噬消除；二是中等大的免疫复合物(约等于19S)，沉着于局部，如肾脏基底膜、皮肤基底膜、肝脏间质、血管内壁、肌肉、关节滑膜、内分泌腺等处，这些复合物可激活补体，导致组织损伤；第三类是小的免疫复合物(小于19S)，游离存在于血液或其他体液中，这种可溶性复合物的存在和其含量变化对于免疫复合物病的发病机制、病程演变和诊断的研究都具有理论和实际意义。
实验原理
一定浓度的MW6 000～8 000的聚乙二醇(PEG)，能沉淀免疫复合物，但不能沉淀正常球蛋白，沉淀的免疫复合物可用放射免疫法或用分光光度计测定其含量。
主要试剂
1. 0.1mol/L硼酸盐缓冲液称取硼砂0.64g，硼酸0.51g溶解于100ml蒸馏水中，pH值8.4。
2. 6%PEG取6gPEG(MW6 000)，溶于100ml硼酸盐缓冲液中。
3. 氯化铯溶液称取CsCl 1g，溶解于14ml蒸馏水中。
4. 热凝聚IgG、试验血清、毛细沉淀管(3×60mm)等。
实验步骤
1. 取被检血清作1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32稀释，同时稀释热凝聚IgG，并设缓冲液对照。
2. 各管加6%PEG溶液，混合，4℃过夜。
3. 取细沉淀管，各管加氯化铯溶液约10μl，上层加各种稀释血清，3000r/min离心10min
4. 取出，对着黑色背景观察，在两液交界，如出现白色沉淀环即为免疫复合物阳性。热凝聚IgG对照也应出现不同程度的沉淀环，缓冲液对照不出现环状沉淀。
热凝聚IgG制备方法：
全部免疫复合物检测阳性对照，均可用热凝聚IgG,其制备方法如下。
1. 取Cohn’sFⅡ球蛋白(或纯化IgG)1g，溶解于100ml 0.15mol/L生理盐水中，放室温2～3h。
2. 放63℃水浴中加热12min。
3. 分次(每次1g)缓慢加入67gNa2SO4，放4℃ 1h。
4. 取出后，2 000 r/min离心20min。
5. 将沉淀物溶解在适当的缓冲液中(如CFD缓冲液，C1q缓冲液等)，并用相同的缓冲液透析一昼夜。最后稀释至含蛋白量约为12～15mg/ml，保存于-20℃备用，用时将蛋白含量稀释至1mg/ml。
