胰蛋白酶的含量测定方法
照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定底物溶液制成后应在2小时内使用。取N-苯甲酰L精氨酸乙酯盐酸盐85.7mg,加水溶解使成100ml,作为底物原液;取10ml,用磷酸盐缓冲液(取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液13ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液87ml混合,pH值为7.6)稀释成100ml,恒温于25.0℃±0.5℃,以水作空白,在253mm的波长处测定吸光度,必要时可用上述底物原液或磷酸盐缓冲液调节,使吸光度在0.575~0.585之间供试品溶液取本品适量,精密称定,加0.001mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含50~60胰蛋白酶单位的溶液。测定法取底物溶液3.0ml,加0.001mol/L盐酸溶液200μl,混匀,作为空白。另精密量取供试品溶液2004,加底物溶液(恒温于25.0℃±0.5℃)3.0ml,立即计时,混匀,使比色池内的温度保持在25.0℃士0.5℃,在253nm的波长处,每隔30秒读取吸光度,共5分钟。以吸光度为纵坐标,时间为横坐标,作图;每30秒吸光度的改变应恒定在0.015~0.018之间,呈线性关系的时间不得少于3分钟。若不符合上述要求,应调整供试品溶液的浓度,再作测定。在上述吸光度对时间的关系图中,取成直线部分的吸光度,按下式计算。P 0.003TW 式中P为每1mg供试品中含胰蛋白酶的量,单位;A1为直线上终止的吸光度;A2为直线上开始的吸光度;T为A1至A2读数的时间,分钟;W为测定液中含供试品的量,mg;0.003为在上述条件下,吸光度每分钟改变0.003,即相当于1个胰蛋白酶单位
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