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糖类染色实验——黏液物质染色

2019.4.06
实验方法原理在人体和动物体中能够分泌黏液物质,依其物质中含有的酸基不同,所以分为中性黏液、酸性黏液和混合性黏液,也可被称为中性黏多糖、酸性黏多糖和混合性黏多糖,常用 Mowry 阿尔辛蓝高碘酸 Shiff 反应(ABPAS)染色方法。
实验材料

石蜡组织切片

试剂、试剂盒

阿尔辛蓝 8 GS冰醋酸蒸馏水麝香草酚高碘酸乙醇二甲苯中性树胶碱性复红盐酸焦亚硫酸钠(偏重亚硫酸钠)双重蒸馏水

实验步骤


Schiff 染色液:碱性复红 1 g,1mol/L 盐酸 20 ml,焦亚硫酸钠(偏重亚硫酸钠)2 g,双重蒸馏水 200 ml。先将 200 ml 双重蒸馏水煮沸,稍有火焰,加入 1 g 碱性复红,再煮沸 1 min,冷却至 50℃ 加入 20 ml1mol/L 盐酸,待 35℃ 时加入 2 g 焦亚硫酸钠。室温中 2 h 之后见稍带红色,5 h 之后变为无色液体。棕色瓶内装好,放入冰箱中保存待用。


阿尔辛蓝染色液:阿尔辛蓝 8 GS 1 g,冰醋酸 3 ml,蒸馏水 97 ml。用前过滤,在溶液中加入麝香草酚 2 粒防腐。pH 值为 2.6~3.00 之间。


1. 石蜡组织切片,常规脱蜡至水。


2. 蒸馏水浸洗 1 min。


3. 3% 乙酸液处理 3 min。


4. 阿尔辛蓝染色液染色 30 min,蒸馏水洗 2 次。


5. 3% 乙酸液处理 1 min,蒸馏水洗 2 次。


6. 高碘酸氧化 10 min。


7. 自来水冲洗,蒸馏水浸洗 2 次。


8. 在 Schiff 染色液中染色 10~20 min(根据室温可适当延长或缩短时间)。


9. 自来水浸洗 2 min(不宜在水中停留时间过长,以免背景较深)。


10. 无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。

展开 
注意事项


1. 阿尔辛蓝染色液使用时不能摇动,防止污染组织切片。


2. 高碘酸氧化液不能存放时间较长,防止失去氧化效果。

其他

结果:中性黏液物质呈红色,酸性黏液物质呈蓝色,中性和酸性黏液混合物质呈紫红色。


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