卵巢癌患者CA125表达和免疫状态关系研究
【摘要】 目的 探讨卵巢癌患者血清CA125和机体免疫功能的关系及其临床意义。方法 采用流式细胞术检测患者外周血细胞CD3+、CD4+、NK+ (CD3-/CD（16+56）＋)浓度细胞的百分率，采用酶联免疫法检测患者血清CA125的浓度。结果 卵巢癌患者血清CA125浓度显著高于正常对照组（P <0.01）：患者CD3+、CD4+、和NK+细胞均显著低于正常对照组（P<0.05或P <0.01）。随着患者血清CA125浓度的增加， CD3+、CD4+ 、NK+细胞均逐渐降低，并呈显著的负相关（相关系数分别为r1=-0.959，P <0.01；r2=-0.923，P <0.05；r3=-0.912，P <0.05）。随着临床分期的增加，CA125浓度逐渐增加，CD3+、CD4+和NK+细胞则逐渐降低;伴肿瘤转移者的CA125浓度显著高于未转移者（P <0.01）,而CD3+、CD4+和NK+细胞却显著低于未转移者（P <0.05）。结论 卵巢癌能引起患者血清CA125表达率明显上升，而机体免疫功能显著下降。CA125的表达与患者免疫状态之间以及它们与临床生物学行为之间都有一定关系。
【关键词】 卵巢癌 肿瘤标志物 CA125 免疫状态
近年来，血清CA125检测已被列为卵巢癌临床常规检测。因为CA125的表达水平与卵巢癌的诊断和病情发展的监测都具有重要的实用价值［13］。T淋巴细胞在机体免疫中占重要地位，外周血T淋巴细胞亚群的变化是反映机体细胞免疫状态的较好指标。肿瘤细胞表面的肿瘤抗原直接激活CD3+、CD4+ 和 NK+，从而抑制杀伤肿瘤细胞，因此CD3+、CD4+ 和 NK+能反映出卵巢癌患者机体免疫状态在肿瘤的发生、发展过程起重要作用［47］。但卵巢癌患者CA125表达水平和机体免疫状态之间的关系如何，以及对二者同步检测的临床意义如何，目前尚未见文献报道。为此，我们对45例卵巢癌患者的血清CA125浓度和机体免疫状态进行了同步检测和分析。结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 临床资料
收集我院妇产科2000～2003年12月经临床和病理检查确诊的卵巢癌患者血液标本45例。年龄41～76岁，中位年龄57岁。分化程度：低分化12例、中分化16例，高分化17例，临床分期：I期8例，II期13例，III期19例，Ⅳ期5例，患者均为初诊手术患者，术前未接受放射治疗、化学治疗和免疫治疗。选择42例健康人外周血作为正常对照组。
1.2 仪器及分析软件
流式细胞仪为FACSCalibur（美国BD公司）。氩离子激光功率为15mW，激发光波长488nm，用BD公司提供的CellQuest软件程序每份样品获取2×104个细胞；并用该软件程序分析CD3+细胞、CD4+细胞和NK+细胞的表达率。
1.3 方法
样品制备：取患者手术前静脉血2ml，其中1ml加肝素抗凝，做机体免疫功能测定。T细胞亚群CD+3、CD+3/CD+4/（CD4）、CD-3/CD+（16+56）细胞检测：取100μl全血细胞，加10μl鼠抗人3色（单色或双色）标记的单克隆抗体，即CD-3-CY5/CD4-FITC/CD3-FITC/CD（16+56）PE单抗试剂，在4℃冰箱中反应30min，再加2ml溶红细胞液，再反应5min，然后以离心法用PBS洗2遍，再加0.5mlPBS混匀，后上机检测CD3+、CD4+和NK+（CD3-/CD+（16+56））细胞检出率CD3- CY5/CD4-FITC/CD3-FITC/CD（16+56）PE等单抗试剂均购自苏州市苏医基因生物技术公司；溶红细胞液由本实验室自行配制。血清CA125浓度检测：用患者另1ml静脉血取血清，采用酶联免疫法按试剂说明书提供的实验程序，用酶标仪检测血清CA125的浓度。酶联免疫试剂由瑞典康乃格公司提供。
1.4 统计学分析
采用SPSS统计软件进行分析，计量资料采用t检验。某些参数做直线回归分析。
2 结果
2.1 卵巢癌患者血清CA125浓度和免疫功能的变化
对45例卵巢癌患者血清CA125浓度和患者外周血中CD3+、CD4+和NK+细胞的检出率进行了测定和分析。结果发现，卵巢癌患者CD3+、CD4+ 和NK+细胞的检出率均显著低于正常对照组（P <0.05或P <0.01），血CA125浓度却显著高于正常对照组（P <0.01）（见表1）。如果血清CA125浓度>35U/ml者为升高时，卵巢癌患者血清的CA125浓度升高者为91.1%(41/45)。
2.2 患者血清CA125浓度与免疫功能的关系
随着患者血清CA125浓度的增加，CD3+、CD4+和NK+细胞的百分率逐渐减低（见表2），并有明显负相关关系。其相关系数分别为r1=-0.959，P 1<0.01; r2=-0.932,P 2<0.05; r3=-0.912,P3<0.05。表1 卵巢癌患者血清CA125表达
2.3 临床分期和转移对血清CA125浓度、免疫状态的影响
随着临床分期的增加，卵巢恶性肿瘤患者血清CA125浓度逐渐增高，如果I期患者血清CA125浓度为100U/ml，II期、III期、IV期则分别为141U/ml 、233U/ml和290 U/ml。而患者外周血中CD3+细胞、CD4+细胞、NK+细胞的百分率则均呈逐渐降低的变化，但它们之间差异未见显著性（P >0.05）（见表3）。在45例卵巢恶性肿瘤患者中，有21例患者出现了远处器官转移，有24例尚未发现肿瘤转移。肿瘤转移患者的血清CA125浓度显著高于未转移者（P <0.05）；肿瘤转移患者的CD+3 、CD+4 和NK+细胞的检出率却显著低于未转移者（P <0.05）（见表4）。表3 不同临床分期患者血清CA125和 免疫状态的分布表4 不同转移情况患者血清CA125和免疫状态的分布
3 讨论
3.1 卵巢癌患者血清CA125表达和机体免疫状态的特征
CA125（cancer antigen 125, CA125）是很重要的卵巢癌相关抗原,是一种大分子多聚糖蛋白，存在于上皮性卵巢癌组织和患者血清中，主要用于辅助诊断恶性浆液性卵巢癌、上皮性卵巢癌，同时也是手术切除，化疗后疗效观察的指标，有较大的临床实用价值。卵巢癌患者血清CA125水平明显升高，手术和化疗有效者CA125水平很快下降。若有复发时，CA125升高可先于临床症状出现之前。因此，它是观察疗效、判断有无复发的良好指标。本组对45例卵巢恶性肿瘤患者血清CA125检测阳性者（>35U/ml）检出率为91.1%，其浓度的平均值也显著高于正常对照组，并随着肿瘤临床分期的增加而逐渐升高；伴肿瘤转移者的CA125水平升高显著高于未转移者。T淋巴细胞在机体免疫中占重要地位，外周血T淋巴细胞亚群的变化是反映机体细胞免疫状态的较好指标。肿瘤细胞表面的肿瘤抗原直接激活CD3+、CD4+ 和 NK+，从而抑制杀伤肿瘤细胞，因此CD3+、CD4+ 和 NK+能反映出卵巢癌患者机体免疫状态在肿瘤的发生、发展过程起重要作用。本组对45例卵巢恶性肿瘤患者机体免疫功能检测结果显示：患者机体免疫功能均显著降低，CD3+、CD4+ 和NK+细胞均有显著降低。本组结果还发现，随着患者血清CA125浓度的增加，其CD3+、CD4+ 和NK+细胞水平逐渐降低，并呈显著负相关；且随着临床分期的增加CD3+、CD4+ 和NK+细胞的检出率也逐渐减低；伴肿瘤转移者，其CD3+、CD4+ 和NK+细胞检出率显著低于未转移者。由此可见，机体免疫状态在判断卵巢癌患者病情发展上也有一定临床意义；这些变化和肿瘤转移有密切关系。所以，卵巢恶性肿瘤患者血清CA125浓度显著升高，免疫功能明显降低；并且二者之间以及与临床分期、肿瘤转移之间均有十分密切的关系。
3.2 CA125表达和免疫状态之间关系分析的临床意义
随着卵巢癌患者病情发展，患者血清CA125浓度逐渐升高，免疫功能逐渐下降，而且二者有显著负相关性。随着肿瘤患者病情的发展，肿瘤某些生物学特性（包括血清癌蛋白成分、机体免疫状态和其它一些生物学指标等）同时发生一些变化。进而提示这些指标之间有一定的相关性。众所周知，随卵巢癌的进展、临床分期的增加、肿瘤转移的发生（即病情加重），患者血清CA125浓度则逐渐升高［8］。与此同时，卵巢癌患者机体免疫功能则逐渐降低。提示肿瘤细胞的癌蛋白表达与机体免疫功能之间有一种间接的相关性。即当患者血清CA125浓度显著增高时，患者外周血的CD3+、CD4+和NK+细胞水平显著降低。所以，对卵巢癌患者血清CA125水平和机体免疫状态的同步监测，不仅可以从多指标上综合评价卵巢癌的发生、发展规律，而且还有助于卵巢癌的诊断、疾病进展的监测和控制、治疗方案的制定和治疗反应观察，以及患者预后的估计等。
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