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T4 RNA连接酶的基本信息介绍

2022.10.23

  T4 RNA Ligase主要用于RNA和RNA之间的连接,连接时需要5'磷酸基团和3'羟基的存在。不仅可以进行RNA分子间的连接,也可以进行RNA分子(最短8个碱基)的环化连接。

  T4 RNA Ligase可以用于RNA和单核苷酸之间的连接,单核苷酸必须为5'和3'均磷酸化的形式,此时常用于RNA的3'末端标记。

  T4 RNA Ligase也可以用于DNA和RNA之间的连接。当DNA提供5'磷酸基团,RNA提供3'羟基时,连接效率较高;当DNA提供3'羟基,RNA提供5'磷酸基团时,连接效率非常低。

  T4 RNA Ligase也可以用于DNA和DNA之间的连接,但连接效率非常低。主要用于DNA的环化连接,例如5' RACE中的cDNA环化。DNA和DNA之间的连接尽管可以进行,但比较困难。

  用途:用RNA 3'末端标记;RNA和RNA分子间连接;寡核苷酸的环化;tRNA修饰;5' RACE中寡核苷酸连接到cDNA单链;在蛋白质特定位点引入非天然氨基酸。

  来源:由大肠杆菌表达,表达基因的来源为T4噬菌体。

  活性定义:37℃30分钟内,催化1 nmol 5'-[P]-(A)12-18成为磷酸酶不能消化的环形产物所需的酶量定义为1个活性单位。

  活性检测条件:50mM Tris-HCl(pH7.5),10mM MgCl2,10mM DTT,1mM ATP,10μM 5'-[P]-(A)12-18(10μM in 5'-termini)。

  纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶,不含磷酸酯酶。

  酶储存溶液:10mM Tris-HCl(pH7.5),1mM DTT,50mM KCl,0.1mM EDTA,50%(v/v)glycerol。

  Reaction Buffer(10X):500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃),100mM MgCl2,100mM DTT。

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