细胞染色及注意事项
1、细胞染色部位
细胞表面染色
胞内抗原染色
同时标记胞膜和胞内抗原
单色标记
多色标记
2、细胞表面标记
表面抗原也可能表达于细胞内
染色细胞表面标记的细胞一定是活的未标记细胞
亲细胞抗体的存在，使染色复杂。可用洗涤白细胞的方法，或在不含离子的缓冲液中37C孵育1小时，可有效去除亲细胞抗体
Fc受体，可以加外源性免疫球蛋白阻断或采用同型对照
3、细胞内标记
对细胞打孔，使单抗可以进入细胞内，同时又不破坏细胞结构的完整性
一般来说，进行胞内抗原染色时不能同时检测细胞的活性，除非用EMA标记
检测某一抗原是否表达，以及对抗原进行表达定位时，检测同一标本的胞膜和胞浆抗原要分开进行。
对于某些核酸染料（如DAPI、TO、AO等）为活胞染料，无需固定或透膜
4、同时检测胞膜和胞内抗原
对表面标志、胞内抗原、DNA含量可任意组合同时分析 。
染色步骤是：细胞表面标志--固定--细胞打孔--胞内抗原--DNA含量 。
需要认识到的是，用于固定和打孔试剂的多重影响，有些条件适合某一参数而对别的参数可能非常不合适。
每一步荧光染料的选择与抗体的选择一样重要。对细胞表面标记来说，一种荧光染料一定不能被随后的打孔方法或试剂所影响。对胞内抗原检测来讲，荧光素分子要足够小，可以穿透打孔后的细胞。
5、单色标记
间接标记时，可选择单色标记
6、多色标记
考虑荧光信号之间的干扰。
细胞补偿、微球补偿
一些联合使用的抗体会彼此阻碍与各自抗原的结合，比如通过空间位阻。因此，抗体组合使用前要与单色抗体标记的结果做比较。
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