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过载染色 SDS 凝胶扫描法估测纯度实验

2019.3.28

由于蛋白质在 SDS 凝胶上可得到高分辨分离，并可用考马斯亮蓝（CBB) 给予灵敏的染色，故按本单元实验 4 所述的方法，对经 SDS 凝胶分离的蛋白质制备物进行染色和脱色后扫描，可得到蛋白质样品的纯度。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

试剂、试剂盒	考马斯亮蓝（CBB) 染色液脱色液
实验步骤	试剂考马斯亮蓝（CBB) 染色液脱色液 (配方，见“试剂的配制”，PP.184~189) 操作程序 1) 按实验 4(pp.159~160) 所述，取一较纯蛋白质的若干稀释的样品（约含 1、3、10 和 30ug 的总蛋白), 于小型 SDS-聚丙烯酰胺（10%) 凝胶进行电泳、染色和脱色。 2) 对已脱色的凝胶扫描，测定主带（推测是目的蛋白）及各副带（推测是很明显的杂蛋白）中所含染料结合物的量。 3）假定所有蛋白质每微克所结合的 CBB 量都是相同的，据此计算主带和副带的相对量。一些含量甚少的杂蛋白只有在过载的凝胶泳道上才看得见，当总蛋白加样量仅为 1ug 时就看不见。展开

试剂、试剂盒

考马斯亮蓝（CBB) 染色液脱色液

实验步骤

试剂

考马斯亮蓝（CBB) 染色液

脱色液

(配方，见“试剂的配制”，PP.184~189)

操作程序

1) 按实验 4(pp.159~160) 所述，取一较纯蛋白质的若干稀释的样品（约含 1、3、10 和 30ug 的总蛋白), 于小型 SDS-聚丙烯酰胺（10%) 凝胶进行电泳、染色和脱色。

2) 对已脱色的凝胶扫描，测定主带（推测是目的蛋白）及各副带（推测是很明显的杂蛋白）中所含染料结合物的量。

3）假定所有蛋白质每微克所结合的 CBB 量都是相同的，据此计算主带和副带的相对量。一些含量甚少的杂蛋白只有在过载的凝胶泳道上才看得见，当总蛋白加样量仅为 1ug 时就看不见。

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纯度实验

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