肿瘤标志物检测的影响因素和应用原则(4)
五、临床免疫测定的标准化和质量控制中存在的问题
㈠ 临床免疫测定标准化的一般原则
临床免疫测定标准化的目的，就是要改善实验室测定结果的准确性，从而提高不同的实验室之间结果的可比性。进行标准化的先决条件是，标准品和检测 物应该 是相同的，否则标准化就无从谈起。但目前的许多临床免疫测定项目中，标准品往往没有达到这一要求。涉及到免疫测定标准化的组织有，世界卫生组织（WHO）生物学标准化专家委员会（ The Expert Committee on Biological Standardization ，ECBS ），负责建立生物物质的国际标准及参比材料。 WHO 通过国家生物学标准和质控物研究所（ National Institute for Biological Standards and Control ，NIBSCC ）提供大多数多肽激素和一些肿瘤标志物的国际标准品。一些地区性组织也制备标准品，如美国的疾病控制中心（ Centers of Disease Control ，CDC ）、美国病理学家协会的国家委员会（ National Committee of the College of AmericanPathologists ）、国家卫生研究所（ National Institute of Health ，NIH ）等提供用于研究目的的多肽激素标准品。 IFCC 也已组织制备了一种脂蛋白和血清蛋白的标准品，其可通过CAP 得到。国际癌症生物学和医学学会（ International Society of Onco-developmental Biology and Medicine ）已起动一个肿瘤标志物抗原决定簇绘图计划。
表 2 各种免疫测定项目 标准品 的一般要求
要求 | 一级标准 | 二级标准 | 三级标准 |
来源 | 标准化专家委员会 | 多个 | 多个 |
使用时间 | 10 ～ 20 年 | 1 ～ 5 年 | 1 ～数年 |
制备 | 纯化物质，置于含 载体蛋白的缓冲液 | 纯化材料，混合血清， 含载体蛋白的缓冲液 | 血清或血浆，人工蛋白为基质的缓冲液 |
定值方法 | 多中心合作研究 | 与一级标准比对 | 与二级标准比对 |
贮存方式 | 冻干 | -70 ℃ 保存 | 冰冻保存或冻干 |
㈡ 临床免疫测定影响质量的三个主要因素是：抗原、抗体、基体（基质）
1 ．抗原、抗体
⑴ 确认样品中被检抗原和校准品中抗原的一致性。
⑵ 制备抗体时使用的抗原和样品中抗原的一致性。
⑶ 抗原过剩的识别。
⑷ 试剂使用的是多克隆抗体，则抗体的纯度很重要；试剂使用的是混合单克隆抗体则每批抗血清内各单克隆抗体的组成及相对比例很重要，并要保持恒定。另外，很多 肿瘤标志物是糖蛋白或粘蛋白，糖基化的不均一性可能导致其免疫反应性某些变化，从而引起测定结果的差异。
⑸ 校准品稳定性、无混浊。
⑹ 抗原抗体反应时所处的基体（基质）状况应保持恒定和一致。
2 ．基 质效应
⑴ 免疫测定的基质效应是一个现象的描述，它是指干扰抗原、抗体反应，而与分析物本身无关的非特异性因素 。同一基质状态的基质效应随方法及检测条件而异。
⑵基质效应是绝对的，只要处理过的样品和测定样品的基质状态不一，一定有基质效应，基质效应又是相对的，只要认可某一方法的基质效应可忽略不计，或者由基质效应对某方法引入的误差在可接受水平，那么衡量另一方法是否具有基 质 效应时，应作方法学比较。若处理过的样品和测定样品的结果分布不同，说明基质效应明显。 反之属可接受 。也即认为“无” 基质效应。
⑶严格讲，不同批号试剂，它们产生的基质效应也不一致。
⑷度量有无基质效应，或者了解不同方法间的可比性，最佳样品是人新鲜样本。
⑸一定要懂得单一标准液，校准品，质控品和新鲜样品间的区别，并正确使用。
⑹不应用质控品作校准品去校准仪器，不仅是基质差异，而且是校准品和质控品定值的水平不一。
⑺ 室内质控用的质控品仅用于各检验科日常工作中重复性和精密度的控制。由于各检验科的检验方法和厂商定值的方法不一致，不可将定值血清的靶值来定值。
⑻衡量某一方法或试剂是否准确可靠，唯一可信的方法是使用人新鲜样本进行比较，仅以控制品测定值相似或等于定值，不足以说明方法的准确度。
⑼校准品是公司指定用来校准某测定系统（仪器＋试剂＋方法程序）的，是考虑到它具有基质效应的情况下，人为赋予校准品的校准值。因此校准品必须专用于某一测定系统。应鼓励检验科使用仪器厂商指定的试剂和校准品。
⑽同一个校准品用于不同仪器时，应该有不同的校准值。不轻易使用某一校准品的校准值对于各种仪器作校准。
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