双向电泳的实验相关试剂配制
1． Bradford 工作液
95%乙醇 25ml 先用乙醇溶解考马斯亮兰G250，溶解完后再加磷
85%磷酸 52ml 酸，最后超纯水定容至500ml。过滤后置于棕色瓶
考马斯亮兰G250 0.035g 外加油皮纸保存（Bradford不稳定，一周内有效）
2． 裂解液
尿素 8M
硫脲 2M
CHAPS 4%
DTT 60 mM
Tris—base 40 mM（如果有条件可以添加PMSF 0.5mM和5%的Pharmalate）
3. 水化液储液
尿素 8M
硫脲 2M
CHAPS 4%
Tris—base 40 mM
4. 分离胶buffer (pH8.8) 250ml
SDS 0.4% 1g
Tris—HCl 1.5M 45.4275g
5. 浓缩胶buffer (pH6.8) 100ml
SDS 0.4% 0.4g
Tris—HCl 0.5M 6.07g
6. 凝胶储存液（30%的丙烯酰胺） 250ml
Acr 29.2% 73g
Bis 0.8% 2g
7. 电极缓冲液（跑一次要配制2500ml）
甘氨酸 43.2g 36g
Tris 9g 或 7.5g
SDS 3g 2.5g
超纯水定容至3000ml 超纯水定容至2500ml
8． 0.5M Tris —HCl pH 6.8储液
6.1g Tris先用30ml超纯水溶解，再用46ml，3M HCl调pH6.8,再加水定容至100ml
9． 平衡液储液
脲（即尿素） 36g
甘油 30% 30ml
SDS 1% 1g
0.5M Tris—HCl pH6.8 10ml 超纯水定容至100ml
10. 平衡液A（一根胶条）
DTT 20mg
平衡液储液 10ml
11．平衡液B（一根胶条）
碘乙酰氨 300mg
平衡液储液 10ml
0.05%溴酚兰 15ul (平衡液A、B均需临时配制)
12．0.5%琼脂糖10ml
琼脂糖 0.05g
电极缓冲液 10ml
溴酚兰 25ul
补：4、5、6的溶液需过滤后储存于4OC备用。
C． 药品
CHAPS 兼性离子去垢剂 去垢剂可破坏蛋白质分子之间的疏水相互作用，
SDS 离子型去垢剂 提高蛋白质的溶解性，防止在等电聚焦时析出
尿素 离液剂 可改变或破坏氢键等次级键的结构，使蛋白质
硫脲 离液剂 变性并使蛋白失活。尿素和硫脲联合使用，可
以大大增加蛋白质的溶解性
DTT 还原剂 断裂蛋白质分子中Cys残基之间形成的二硫键，增加蛋白质的溶解性。但过分提高DTT的浓度，由于它pKa在8左右，因而会影响pH梯度。DTT在碱性pH下会去质子化，等电聚焦时会损耗，导致二硫键复原，蛋白质沉淀
BSA Bradford中制作标准曲线用
无水乙醇 和磷酸一起，提供Bradford中的环境
磷酸 提供Bradford中的酸性环境
Tris 构成缓冲液的成分，可用于抗衡pH的变化
IPG buffer
覆盖液 即矿物油，防止水分蒸发，样品干燥。
丙烯酰胺（Acr） 以丙烯酰胺为单体，甲叉二丙烯酰胺为交联剂，
甲叉二丙烯酰胺 （Bis） 在催化剂（Aps）和引发剂（TEMED）作用下，聚合交联成三维网状结构
琼脂糖
溴酚兰 指示剂作用
碘乙酰氨（IAA） 平衡液B中使用，中和A液中的DTT
正丁醇 比聚丙烯酰胺密度小，用于凝胶制作过程中的压胶
甘油 无机盐的良好溶剂，热稳定性好
Marker
考马斯亮兰G250（Bradford法用） 考马斯亮兰G250有红、蓝两种不同颜色的形式在一定浓度的乙醇及酸性条件下，可配成淡红色的溶液，当与蛋白结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定，反应化合物在465~595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色 深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量
甘氨酸 与Tris构成缓冲系统
AgNO3
EDTA 金属螯合剂，可以结合银离子，终止银染过程
