免疫组化流程
实验步骤
第一天：
1、组织切片置于60℃烘烤1hr
2、二甲苯1、2 分别浸泡15min，脱蜡
3、水化：100% Etoh 10min X 2
95% Etoh 5min X 1
85% Etoh 5min X 1
70% Etoh 5min X 1
注：以下步骤切勿让组织处于干燥状态！
4、将切片置于修复盒，浸入PBS中清洗5min，同时配制抗原修复液：3ml抗原修复液加入297ml纯水中。
5、将4 中的PBS倒掉，加入配好的抗原修复液
6、将修复盒及切片放入微波炉“中高火”加热煮沸（第一次约5min）。煮沸后取出，打开盖子静置1min，若修复液减少，则补充之。前后煮沸共需5次。
7、室温冷却 (盖子勿打开) 30-60min。（配一抗）
8、弃修复液，再次加入PBS 洗3次X5min。
9、加入配好的羊血清-抗体混合液（B6乳鼠心脏约30ul/片，B6成年鼠约50ul/片，SD成年鼠约80ul/片）。
10.切片置于湿盒，4 ℃ 孵化过夜。
第二天
1、从冰箱中取出湿盒，置于室温1hr。
切片放回修复盒，PBS 洗4min X 6次（摇）（避光，配二抗-羊血清混合液）
注：以下操作均在避光下进行！
2、取出切片，用纸巾擦干（切勿碰触组织）
3、切片置于湿盒中，加二抗（保证组织浸没在溶液中，所加体积参考第一天步骤9）
4、盖上湿盒盖子，封闭1hr
5、取出切片，重新放入修复盒，用PBS清洗4min X 6次。
6、取出切片，用纸巾轻轻擦干（切勿碰触组织）
7、用含有DAPI的防淬灭封片剂封片
10. 用指甲油将盖玻片周围封闭
11. 处理好的切片用锡箔纸包好4℃ 保存。
推荐
