ELISA样本制备及注意事项（二）
七、ELISA 实验中关节滑液的采集、处理和保存
1、口腔关节：患者取坐位，常规消毒后，作皮下及关节后区局部浸润麻醉。然后嘱患者大张口，采用装有2ml生理盐水的注射器（5号针头）作关节上腔穿刺，髁后进针，针尖方向斜向前、内、上，抵达关节结节后斜面后稍后退，回抽如发现有淡黄色液体，即表明已进入关节上腔，注入2ml生理盐水，反复注入、回抽五次；
2、膝骨关节滑液：无菌穿刺取得关节液3ml；
3、将采集的关节滑液用离心机4℃，1500rpm离心15min；
4、取上清。分装冻存备用：
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
5、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。
八、ELISA 实验中细胞的采集、处理和保存
1、细胞板贴壁细胞直接裂解：细胞弃培养上清，PBS清洗三遍，加适量裂解液重悬（过量会降低浓度，很重要），超声破碎或用枪吹打100下；
2、细胞团块裂解：细胞团块加1ml PBS重悬（注意不要过于剧烈造成细胞破裂），1000rpm离心5分钟，弃上清，重复3次，加适量裂解液重悬（过量会降低浓度，很重要），超声破碎或用枪吹打100下；
3、悬浮细胞裂解：转移至EP管，1000rpm离心5分钟，弃上清，PBS洗三遍，加适量裂解液重悬（过量会降低浓度，很重要），超声破碎或用枪吹打100下；
4、冰上裂解30mins，用离心机4℃，12000rpm离心10mins；
5、取上清。分装冻存备用：
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。
根据要检测的指标，必要时需要加入蛋白酶抑制剂。如果处理后马上检测，也可以不加这些抑制剂直接裂解，裂解液的量根据不同细胞系会有不同，原则为裂解后总蛋白浓度不低于0.5mg/ml。
九、ELISA 实验中易碎软组织（脑、肝、肾）的采集、处理和保存
1、称取组织块（50mg-100mg），按质量体积比1：9加入裂解液（例：50mg组织湿重加入450ul裂解液）；
2、冰水浴中用眼科剪剪碎组织块；
3、冰水浴中电动匀浆机或超声破碎；
4、用离心机4℃，12000rpm离心15mins；
5、取上清。分装冻存备用：
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。
根据要检测的指标，必要时需要加入蛋白酶抑制剂。如果处理后马上检测，也可以不加这些抑制剂直接裂解。
十、ELISA 实验中心肌、肌肉组织的采集、处理和保存
1、称取组织块（50mg-100mg），按质量体积比1：9加入裂解液（例：50mg组织湿重加入450ul裂解液）；
2、冰水浴中用眼科剪剪碎组织块；
3、冰水浴中研磨棒研磨或超声破碎；
4、用离心机4℃，12000rpm离心15mins；
5、取上清。分装冻存备用：
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。
心肌、肌肉组织无法用匀浆机匀浆，组织块会绞入钻头形成团块，无法被匀浆机刀头切碎，需用研磨或超声才能充分破碎。根据要检测的指标，必要时需要加入蛋白酶抑制剂。如果处理后马上检测，也可以不加这些抑制剂直接裂解。
十一、ELISA 实验中上皮组织（皮肤、膀胱、肠）及人或大鼠眼角膜的采集、处理和保存
1、称取组织块（50mg-100mg），按质量体积比1：9加入裂解液（例：50mg组织湿重加入450ul裂解液）；
2、冰水浴中用眼科剪剪碎组织块；
3、冰水浴中研磨棒研磨或超声破碎；
4、用离心机4℃，12000rpm离心15mins；
5、取上清。分装冻存备用：
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。
上皮组织韧性较强，较难剪碎，需要增加组织破碎时间才能充分破碎。根据要检测的指标，必要时需要加入蛋白酶抑制剂。如果处理后马上检测，也可以不加这些抑制剂直接裂解。
十二、ELISA 实验中小颗粒组织（神经节、小鼠眼角膜、巩膜）的采集、处理和保存
1、加入200ul裂解液；
2、冰水浴中用显微剪剪碎组织块；
3、冰水浴中研磨棒研磨或超声破碎；
4、用离心机4℃，12000rpm离心15mins；
5、取上清。分装冻存备用：
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。
小颗粒组织量比较小，会有靶标蛋白量低于检测限度的风险，注意组织匀浆离心后上清总蛋白浓度需大于0.5mg/ml。根据要检测的指标，必要时需要加入蛋白酶抑制剂。如果处理后马上检测，也可以不加这些抑制剂直接裂解。
