流式细胞术数据分析知识汇总（五）
第四章 FCM数据分析之增殖、周期、凋亡检测
1、细胞增殖检测
CellTrace细胞增殖试剂盒含有细胞膜通透性非荧光酯，可通过扩散透过细胞膜进入细胞，并与胺基反应形成荧光分子。这种无荧光的酯进入细胞后，可被细胞内酯酶转化为荧光产物。活化的琥珀亚胺酯与蛋白质中的胺基基团共价结合，使染料能够长时间保留在细胞中。
随着分裂，荧光越弱
2、细胞周期检测
处于不同细胞周期的细胞DNA含量不同，G0/G1期细胞含有二倍体量的DNA， G2/M期细胞含有四倍体量的DNA，而S期细胞的DNA含量处于二倍体和四倍体量之间。
DNA荧光染料能与DNA结合，DNA含量的多少与荧光染料的结合量成正比，荧光强度反应了DNA吸收荧光分子的多少。通过流式检测就能反应细胞内DNA的含量，区别细胞周期的G0/G1、 S期和， G2/M期细胞的比例。
3、细胞周期分析核酸染料
细胞膜非通透性染料：PI（碘化丙叮）、EB（溴化乙啶），不能进入完整细胞膜，标记时需要通过固定等方法增加细胞膜的通透性。
细胞膜通透性染料：Hoechst、DAPI等能染活细胞的DNA，但需紫外激光激发。
4、增殖及细胞周期
增殖相关Mark:Ki67，Brdu，MCM2,PCNA。
5、Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡
正常细胞膜是不对称的，胞浆面含有带负电的磷脂（磷脂酰丝氨酸，PS）。早期凋亡时，细胞表面不对称性发生改变，PS外翻到胞外侧。
Annexin V是一种钙离子依赖的对PS有高度亲和力的磷脂结合蛋白，可作为探针识别膜表面是否有PS，从而识别凋亡细胞。
PI常用于鉴别死细胞。凋亡细胞的细胞膜仍然是完整的，所以PI不能进入早期凋亡细胞核内。
Annexin V:识别凋亡细胞
PI：识别死细胞
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