细菌中制备基因组DNA实验——氯化铯法
实验方法原理 | 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 培养100 ml 细菌培养物至饱和状态,用JA-20转子4 000 g 离心10 min。
5. 加等体积的氯仿/异戊醇抽提,室温下6 000 g 离心10 min,用宽口吸管将上清液转移至新管中。
6. 加化6体积的异丙醇,轻轻混合直至沉淀下来,用一个封口的巴斯德吸管将沉淀转移至70%乙醇中冼涤。
7. 10 000 g 离心5 min,弃上清,用4 ml TE缓冲液重悬沉淀。
12. 在长波紫外灯下观察梯带,用15号针头和3 ml 塑料注射器移出条带。 |