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YAC实验——YAC文库构建

2019.3.28

YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个DNA复制起点，两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。

实验步骤	1. 尽管当插入片段大于100 kb 时，YAC克隆是可供选择的基因组DNA大片段克隆方法之一，但该系统的一些特性使之很难被迅速采纳为常规克隆手段。 2. 在复杂的酿酒酵母菌的基因组中，通常所用的YAC只是一个单拷贝。 3. 因此在YAC文库中鉴定一个克隆，其信噪比较之在λ噬菌体载体或粘粒载体文库中鉴定同种的克隆更差。 4. 同时，发展一种针对YAC的高密度筛选方法的努力一直步履维艰，仅取得了十分有限的成功，构建YAC文库时不仅需要百倍的努力和巨大的投入，筛选文库时还要耗费大量的人力物力。因此，如果研 5. 究者希望获得含特定序列DNA的YAC克隆，最为可行的方案是首先安排筛选在某中心实验室保存的已有的文库。 6. 最初，YAC文库是用整个棊因组DNA构建的。近来，也有利用携带特定染色体或部分染色体的体细胞杂合体构建文库。 7. 如果靶基因座在染色体上的位置是已知的，那么构建和筛选YAC文库所耗费的人力物力将极大地减少。展开

实验步骤

1. 尽管当插入片段大于100 kb 时，YAC克隆是可供选择的基因组DNA大片段克隆方法之一，但该系统的一些特性使之很难被迅速采纳为常规克隆手段。

2. 在复杂的酿酒酵母菌的基因组中，通常所用的YAC只是一个单拷贝。

3. 因此在YAC文库中鉴定一个克隆，其信噪比较之在λ噬菌体载体或粘粒载体文库中鉴定同种的克隆更差。

4. 同时，发展一种针对YAC的高密度筛选方法的努力一直步履维艰，仅取得了十分有限的成功，构建YAC文库时不仅需要百倍的努力和巨大的投入，筛选文库时还要耗费大量的人力物力。因此，如果研

5. 究者希望获得含特定序列DNA的YAC克隆，最为可行的方案是首先安排筛选在某中心实验室保存的已有的文库。

6. 最初，YAC文库是用整个棊因组DNA构建的。近来，也有利用携带特定染色体或部分染色体的体细胞杂合体构建文库。

7. 如果靶基因座在染色体上的位置是已知的，那么构建和筛选YAC文库所耗费的人力物力将极大地减少。