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酶免疫测定方法

2022.4.22

ACA(抗心磷脂抗体)主要通过抑制血管内皮细胞合成PGI2,干扰血栓调节素、纤溶酶原激活剂和蛋白质C系统的活性,抑制抗凝血酶III的活化等而致凝血前高凝状态,与复发性动静脉血栓形成、反复自然流产及血小板减少症关系密切。

其主要程序为用纯心磷脂的无水乙醇溶液包被聚苯乙烯板,封闭后分别于标本孔和对照孔中加入一定稀释度的被检血清及阳性与阴性对照血清,之后加入酶标二抗和酶底物,终止反应后肉眼观察结果或测吸光度(A)值。

具体步骤如下:

预步骤:先用一定浓度的心磷脂溶液包被聚苯乙烯板的小孔,4℃冰箱过夜,次日取出甩尽液体备用。

(1) 用微量移液器分别加待检血清、阳性对照、阴性对照各100μl于1、2、3孔中,370C水浴箱温育30min。

(2) 用PBS液洗板3次,每次3min,甩干。

(3) 每孔加入酶结合物2滴,370C水浴箱温育30min。

(4) 用PBS液洗板3次,每次3min,甩干

(5) 每孔分别加入显色A液、B液各1滴,混匀。370C水浴箱温育5-10min。

(6) 取出肉眼观察结果。如待检血清溶液与阳性对照一致均为蓝色,表明待检血清为ACA+血清。


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