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用于酶联免疫测定方法(ELISA)建立的抗原

2020.9.14

在目前通常所用的免疫测定试剂盒中所用的抗原一般有三大类,即纯化抗原、合成抗原和基因工程抗原。

纯化抗原系指从人体液、组织或病原体培养物中采用物理化学方法如超速离心、过滤层析、电泳分离等所分离得到的目的抗原,如从HAg高滴度携带者外周血中分离纯化的HAg,从胎盘血中分离纯化的甲胎蛋白(a-fetoprotein),从HIV培养液中裂解纯化的HIV抗原等。纯化抗原的共同特点是,其完全保留了天然抗原所具备的抗体结合特性,所有的决定簇包括立体构型决定簇都不会受到破坏。但纯化抗原的纯度对相应的免疫测定方法的特异性有较大影响。

合成抗原一般均是多肽抗原,如HCV和HIV结构和非结构区的合成多肽抗原,这类抗原因其为多肽片段,缺乏完整抗原所具有的立体构型决定簇,用于相应的抗HCV和抗HIV抗体的检测有可能导致结合这种立体构型决定簇的抗体漏检。

基因重组抗原是在已知目的抗原的核苷酸序列的基础上,采用基因工程技术得到的表达抗原,如乙型肝炎核心抗原(HBcAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、梅毒螺旋体、弓形体、巨细胞病毒(CMV)、HCV和HIV的基因重组抗原等。

在目前的商品ELISA试剂盒中基本上都已使用这些重组抗原。由于基因重组抗原通常为病原体的部分抗原,如梅毒螺旋体的Tl5,Tl7和T47,HCV的核心区及3,4和5,HIV的gp41和gpl20等,因此,用此类重组抗原建立免疫方法来测定相应抗体,难免在测定相应病原体感染的敏感性上有缺陷。

最近,美国Chiron公司为改善抗HCV测定的敏感性,将组成HCV的7个功能区即核心及E1,E2/l,2,3,4和5区中的除2以外的6个表达成一个融合蛋白“MEFA-6”,以这种融合蛋白建立的免疫测定方法的测定敏感性较使用3—4—核心(C25)区融合蛋白的免疫测定方法高2~4倍。

基因重组抗原不但对原抗原的生物学和免疫学特性能最大程度地保留,而且可工业化大量生产,同时没有从生物体液中提纯抗原所存在的传染危险性。


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