DNA片段的亚克隆实验——凝胶块中DNA连接
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 重复基本方案中的步骤1~5。
2. 在高质量的低融点胶中分离久DNA(0.7%,TAE缓冲液),切下体积尽可能小的所需DNA条带(20~50 μl )至小离心管中。 5. 加入11 μl 冰冷的含2×缓冲液、ATP和T4 DNA连接酶的混合物,并于15℃温育1 ~48 h。
6. 在73℃重新融化胶5~10 min 取5 μl 连接产物加于200 μl 感受态大肠杆菌,见基本方案中的步骤8。 |
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