在质粒载体中进行平末端片段的克隆实验
在质粒载体中进行平末端片段的克隆实验
实验方法原理 | 克隆平末端的目的片段时,为最大量地获得“正确”的连接产物,载体和目的 DNA 在连接反应中的比例必须适当。每一重组体中外源 DNA 的连接方向和插入数量都必须用限制酶酶切图谱分析或其他方法加以鉴定。作为一般规律,如果连接反应中质粒和目的 DNA 摩尔数相等,而且 DNA 的总浓度少于 100 μg/ml,获得一定数量的单体闭合重组子是可能的 ( Bercovich et al. 1992)。 |
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实验材料 | T4 噬菌体 DNA 连接酶 限制性内切核酸酶 |
试剂、试剂盒 | ATP 乙醇 聚乙二醇 乙酸钠 TE |
仪器、耗材 | 琼脂糖凝胶 聚丙烯酰胺凝胶 |
实验步骤 |
一、材料 展开 |
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焦点事件
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