寡核苷酸介导的诱变实验
用突变的寡核苷酸引导模板的合成，从而改变DNA序列，突变效率可达50~80%。
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 将一个单链噬菌体产生的噬斑转移至含有1 ml 灭菌TY培养基的1.5 ml 微量离心管中，60℃温育5 min，以杀灭细菌细胞，剧烈振荡以释放琼脂中的噬菌体，离心2 min。
2. 将100 μl 上清转移至1 L 的烧瓶，瓶中装有100 ml 培养基，其中含0.25 μg/ml 的尿苷。 4. 毎4体枳的上清加1体积的5×PEG/NaCl溶液以沉淀噬菌体，混匀，0℃温育1 h。
8. 在1.5 ml 微量离心管内加入下列试剂：
9. 加含尿嘧啶的单链环状DNA模扳（通常为1 μg DNA溶解在1 μl 体积）至磷酸化的寡核苷酸中，加1.25 μl 20×SSC，充分混匀，离心5 s。
12. 取20 μl 在0.8%的琼脂糖上电泳。对照泳道应包括单链环状病毒DNA，双链闭环DNA和带切口的双链坏状DNA。 |
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