电化学发光免疫分析仪法与ELISA法检测乙肝“两对半”
作者：陈朝霞 袁冲 作者单位：710077中国西电集团医院检验科(西安)
【摘要】 目的：分析电化学发光免疫法ECLIA与ELISA法检测乙肝“两对半”少见模式特征。方法：用电化学发光免疫分析仪对954例标本进行乙肝“两对半”的定量检测，对于其少见模式(“1”、“1235”、“1245”、“1345”、“12345”)，随机抽取58例，再用ELISA法检测作对比。结果：电化学发光免疫分析仪法定量检测共11种模式，其中5种少见模式。ELISA法检测结果：少见模式中的“1”主要表现为“阴性”；少见模式中的“1345”主要表现为“145”；“1245”模式主要表现为“145”、“245”；“1235”模式主要表现为“135”；“12345”模式共2例均表现为“15”。结论：本组乙肝“两对半”表现模式较为复杂，电化学发光免疫分析仪技术检测乙肝“两对半”的灵敏度、速度和自动化程度均较高，是目前临床检查乙肝“两对半”的较好方法。
【关键词】 乙肝病毒标志物 电化学发光免疫分析仪法 酶联免疫吸附实验
材料和方法
标本来源及处理：取自我院门诊及住院病人的血清(浆)。所有受试者均系静脉采血，3800rpm离心5分钟分离出血清(浆)，立即上机测定。
试剂、仪器：全自动电化学发光免疫分析仪，全自动微孔洗板机，anthos 2010酶标仪。
方法：乙肝“两对半”定量测定严格按照仪器的操作规程进行实验，所测结果均由仪器自动完成。对其结果中的少见模式，随机抽取58例(有1、1345、1235、1245、12345模式)，并用ELISA法严格按照试剂盒说明书进行操作。每次检测时均设阴阳性对照及质控对照。检测结果用酶标仪判读。
阳性判断标准：HBsAg为定量分析，以IU/ml为单位，浓度≥1时判为阳性；抗HBs为定量分析，以mIU/ml为单位，浓度≥10.0时判为阳性；HBeAg以样本相对光强度单位(RLU)与临界质控相对光强度单位之比(S/Co)为单位，结果≥1.0时判为阳性；抗HBe以S/Co为单位，结果≤1.0时判为阳性；抗HBc以S/Co为单位，结果≥1.0时判为阳性。
结果表述：以1、2、3、4、5分别代表乙肝“两对半”中的HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe和抗HBc，并以阳性项目的序号为该模式的代码，如某病人血清学标志的检测结果为HBsAg阳性，抗HBs阴性，HBeAg阴性，抗HBe阳性，抗HBc阳性，则该模式代码为“145”，余类推。
结果
954例乙肝“两对半” ECLIA法定量检测结果的模式共有11种。对其中58例标本分别用ECLIA法和ELISA法对其进行检测，结果如表1。
表1 ECLIA法与ELISA法检测结果（略）
ELISA法检测结果：少见模式中的“1”主要表现为“阴性”；“1345”主要表现为“145”；“1245”模式主要表现为“145”、“245”；“1235”模式主要表现为“135”；“12345”模式共2例均表现为“15”。
讨论
在“1”模式中，HBsAg绝大多数含量＜4IU/ml，而ELISA法检测阴性，主要因为ECLIA方法敏感，而ELISA法的灵敏度不高，对于极微量的抗原抗体通常检测不出来，特异性差且易受人为因素的影响。
在“1345”模式中，HBeAg含量绝大部分在1.17～11.18之间(单位S/Co)，HBe含量绝大部分在0.22～0.77之间(单位S/Co)，说明HBeAg、抗HBe含量大部分在低值(弱阳性)范围，此种情况可能是“135”模式在向“145”模式的转换过程中［1］。ELISA法检测主要表现为“145”模式，主要因为ELISA法检测不到低浓度的HBeAg。
在“1235”模式中，HBsAg绝大多数含量＞250IU/ml，抗HBs含量绝大多数在10.97～50.72之间(单位mIU/ml)，HBeAg含量在10.84～1352.09之间(单位S/Co)，抗HBs含量大部分在低值，说明此模式也可能是“135”向“145”的中间转换模式［1］或新的不同亚型再感染［2］。ELISA法检测结果主要表现为“135”，主要原因可能为ELISA法灵敏度不高，检测不到低浓度的抗HBs。也有2例抗HBs和HBsAg两种方法检测结果含量均较高，可能为新的不同亚型再感染。“1245”模式可能是“145”模式在抗HBs低滴度阳性后向“245”模式转换过程中［4］或亚临床HBV感染早期［3］，ELISA法检测结果主要表现为“145”、“245”也正说明了这一点。HBsAg、抗HBs含量均较高者可能为新的不同亚型再感染［2］。“12345”模式也可能是HBV血清学标志物模式转换的中间模式［3］或者是亚型感染［3］。而ELISA法检测结果表现为“15”，主要是因为ELISA法检测不到低浓度的抗HBs、HBeAg、抗HBe。
产生“13”模式的原因可能为低滴度抗HBc；前c区突变导致HBcAg变异，以致目前的核心抗原检测系统不能检出抗HBc；或宿主存在选择性免疫缺陷，缺乏HBcAg特异性的T细胞。
产生“15”模式的原因：血清转换期或前c区末端1896位点发生G→A的突变，使得无法合成HBeAg，如果经追踪观察，仍为HBsAg和抗HBc阳性，而HBV-DNA保持阳性，则可能是前C区突变模式。
【参考文献】
1 孙南雄,黄祖瑚,刘雁雁,等.乙型肝炎患者957例血清学标志分析.中华医学检验杂志,1999,22(5):296-298.
2 叶维法,钟振义.肝炎学大典.第1版.天津:天津科学技术出版社,1996,463-515.
3 朱国安.检测后的“乙肝三系”结果如何判断.实用医技杂志,1998，5(3):141.
