“DNA探针”的制备过程
基因组DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。要得到一种特异性DNA探针,常常是比较烦琐的。以细菌为例,细菌的基因组大小约为5×106碱基,约含3000个基因。要获得某细菌特异的核酸探针,通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法,即将细菌DNA切成小片段后(如用限制性内切酶做不完全水解)分别克隆得到包含基因组的全信息的克隆库,然后用多种其他菌种的DNA探针来筛选,产生杂交信号的克隆被剔除,最后剩下的不与任何其他细菌杂交的克隆则可能含有该细菌特异性DNA片段。
cDNA探针是从相应的基因经转录获得mRNA,再通过逆转录酶的作用得到的探针,不含内含子序列。
在体外通过机器可以合成小片段单链寡核苷酸探针。寡核苷酸探针稳定、特异性高,在非常严格的条件下.用寡核苷酸探针进行的杂交试验能检测单个碱基突变和单个碱基的错配,但寡核苷酸探针短,带有的标记物少,敏感性较低。
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