多重PCR在遗传病诊断方面的应用--抗性基因检测
抗生素的广泛使用导致具有耐药性微生物的增多,比如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( methi-cillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)、万古霉素抗性肠球菌( vancomycin resistant enterococcl)和多重耐药结核分枝杆菌( multidrug resistant Mycobacterium tuberculosis)等。
这些病原的快速检测及对应的抗生素抗性快速检测对于隔离病人和阻止疾病的进一步蔓延是很重要的。多重PCR方法能够对这些抗生素抗性基因进行同时检测,节省时间,具有较高的敏感性和特异性。
Strohmenger等应用多重PCR方法同时检测金黄色葡萄球菌的9种耐药基因,包括mecA、aacA~anhD、tetK、tetM、emA、emC、wtA、wtB和wC,并且在反应中加入另外对引物,扩增金黄色葡萄球菌的16 SrRNA作为阳性对照。
通过对分离的3株金黄色葡萄球菌进行检测,多重PCR结果与肉汤微量稀释实验得到的抗性表型一致,证明了多重FCR是一种识别抗生素抗性的快速、简便、精确方法,并且可以用于临床诊断、流行病学研究中用于监测抗性基因的传播还可用多重PCR方法同时检测质粒介导的喹诺酮抗性基因qmA、qrB和qnrS,并用来筛选科威特分离的64株产超广谱内酰胺酶( expanded- spectrum beta-lactamase,ESBL)的肠细菌。
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