狙击肿瘤，PD-1与GITR抗体联用事半功倍（二）
图2. 单细胞测序绘制CD8+ T细胞独特的基因图谱及分析
进一步研究揭示，抗PD-1抗体与抗GITR抗体联合免疫治疗介导形成独特的肿瘤特异性CD8+ T细胞群
如图3A所示，取经抗PD-1抗体、抗GITR抗体以及两种抗体联合分别处理的荷瘤小鼠，在处理后的9天和12天，取瘤内T细胞，进行相关maker标记（PD-1、TIM3、LAG3、KLRG1，CD244和CD44），根据不同标记物的表达情况，绘制瘤内T细胞群。结果显示，经抗GITR抗体，抗PD-1抗体与GITR抗体联合治疗后，抗原特异性CD8+ T细胞在T细胞的不同分化阶段表现出一定的异质性。将各maker异质性细胞群密度图整合分析，发现形成的14号12号和7号细胞集群对PD-1抗体和GITR抗体联合治疗具有高度响应，同时揭示14号细胞集群的出现预示T细胞功能障碍到达终点（早期并未形成14号细胞集群）（如图3B-G）。
图3. 抗体联合治疗后，对功能性障碍的肿瘤浸润CD8+ T细胞群的鉴定
虽然经过以上研究，发现了肿瘤特异性CD8+ T细胞群，但这并不能说明PD-1抗体与GITR抗体联合治疗的长效性。
为了找到抗体联合治疗的长效性的原因，研究者们随后对T细胞群进行表征分析，利用更多的T 活化与分化过程中的标志物对T细胞进行标记，做深度剖析（图4A-B）。经SPADE集群分析显示（图4C-E），由抗GITR抗体驱动的免疫联合治疗12天后，瘤内出现了特殊的记忆性细胞群，此细胞群的形成标志着获得性免疫的开启，维持抗体联合免疫治疗的长效性（图4F-G）。
图4. 抗体联合治疗后，对记忆性CD8+ T细胞群的鉴定
到目前研究节点上，我们已经了解到，虽然PD-1抗体很少引起T细胞功能障碍，但却不能保持免疫治疗的长效性。而GITR抗体与PD-1抗体的联合免疫治疗中，瘤内出现了记忆性的CD8+ T细胞群解释了先前研究者对联合疗法长效性的困惑。
在抗PD-1/GITR联合疗法中CD226广泛表达在肿瘤特异性的CD8+T细胞群中
为了进一步研究抗PD-1抗体与抗GITR联合疗法协同作用于CD8+T细胞群的内在机制，科学家们开始对前文提到的CD226共刺激分子的表达进行深度研究。如图5A所示，在经两种抗体联合治疗后，CD226 mRNA在肿瘤内不同的CD8+T细胞群上广泛性存在。进一步研究发现，经PD-1抗体治疗的MC38小鼠模型，其脾细胞中的抗原卵白蛋白（OVA）特异性的CD8+T表达的CD226蛋白质最高，说明在抗肿瘤过程中，PD-1抗体的治疗对驱动CD226表达的抗原特异性T细胞发挥了关键性的作用（图5B）。
