饲料中金霉素的测定 高效液相色谱法 GB/T 19684-2005
1 范围
本标准规定了以高效液相色谱（HPLC)测定饲料中金霉素的方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中金霉素的测定，检测限为1n g，最低检出浓度为4 mg/kg.
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过在本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所
有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB /T 6 682 分析实验室用水规格和试验方法
GB /T 14699.1 饲料采样
3 方法原理
使用盐酸-丙酮溶液提取饲料中的金霉素，调至pHl.0 -1.2 ，振荡，过滤，注人反相柱分离，紫外检测器检测，外标法定量分析。
4 试荆和材料
本标准所用试剂，除特别注明外，均为分析纯。水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T 6682用水的规定。
4.1 氢氧化钠溶液：400 g/L.
4.2 乙二酸（草酸）溶液：[c(1/2HZC20,)=0.01 mol/L].
4.3 盐酸溶液：[c(HCI)=4 mol/L].
4.4 提取液：丙酮十盐酸溶液（4.3)＋水＝13十1十6.
4.5 流动相：乙二酸溶液（4.2)＋乙睛（色谱纯）＋甲醇（色谱纯）=10十3十2.
4.6 金霉素标准液：
4.6.1 金霉素标准储备液准确称取金霉素标准品0.012 90g（含量大于96.9%，储存于硅胶干燥器中），精确至0.1 m g，置于50m L容量瓶中，用提取液（4.4)溶解并定容至刻度，摇匀，其浓度为250g /L,
贮于4℃～ 6℃ 冰箱中，有效期为一周。
4.6.2 金霉素标准工作液准确移取4 mI一金霉素标准储备液（(4.6.1)于10 mL容量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀，其浓度为100 g/L，现用现配。
5 仪器、设备
5.1 离心机：3 000 r/mine
5.2 pH计：精度0.0 1m V.
5.3 恒温振荡器：300 r/min.
5.4 微孔滤膜（孔径0. 45 pm).
5.5 分析天平：感量0. 1 mgo
5.6 分析天平：感量0.0 1m g.
GB/T 19684-2005
5.7 GE-200高效液相色谱仪 GE-200高压输液泵，GE-200紫外检测器，浙大智达N2010色谱工作站，VertexC18色谱柱。
6 试样的选取和制备
按 G B/ T 14699.1 选取有代表性样品200g -500g ，用四分法缩至100g ，粉碎通过0.45m m孔径筛，充分混匀，贮于磨口瓶中备用。
7 分析步骤
7.1 称取试样lg-10g（金霉素含量大于等于40m g/kg)，准确至0.1 m g，置于具塞锥形瓶中，加人
100 mL提取液（4.4)，手摇2 min，再用盐酸溶液（4.3)调pH至1. 0-1. 2(记录盐酸溶液的消耗量，作为稀释倍数），盖紧塞子，置恒温震荡器（5. 3)中（振荡速度110 r/min)振荡30 mine
7.2 将提取液（7.1）倒人离心管，3000 r/min离心15 min,
7.3 取离心上清液用滤膜（5.4)过滤，滤液作为试样溶液。
7.4 HPLC测定参数的设定：
分 析柱 C18：柱长150mm，内径4.6mm，粒度5um（或类似分析柱）；
柱 温 ：室 温；
检 测 器 ：紫外检测器，检测波长375nm;
流 动 相 速度：1.0 m L/min;
进样 量 ： 10ul-20ul
7.5 定量测定：采用多点外标法，根据浓度与峰面积的线性回归方程计算金霉素的含量（g/L)
8 测定结果的计算
8.1 每千克试样中所含金霉素的质量X(mg）按式（1)计算：
X＝m1\×n
式 中 ：
X— 每千克试样中所含金霉素的质量，单位为毫克（mg);
M1--HPLC试样色谱峰对应的金霉素质量，单位为微克（ug);
m— 试样质量，单位为克（g）；
n— 稀释倍数。
8.2 测定结果用平行样测定的算术平均值表示，保留至小数点后1位。
9 允许差
两个平行测定结果的相对偏差不大于7％0
