使用高效液相色谱法测定头孢氨苄的含量

2021.12.21

一、实验资料

1、检验药品

(1)检验药品的名称头孢氨苄。

(2)检验药品的来源市场购买或送检样品。

(3)检验药品的规格、批号、包装及数量根据药品包装确定,并记录有关情况。

2、质量标准

(1)检验依据《中国药典》(2010版)二部208页“头孢氨苄”:本品为(6R,7R)-3-甲基-7-[R-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸-水合物。按无水物计算,含C₁₆H₁₇N₃O₄S不得少于95.0%。

(2)含量测定照高效液相色谱法。

色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以水-甲醇-3.86%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液(742:240:15:3)为流动相;检测波长为254nm;取供试品溶液适量,在80℃水浴中加热60min,冷却,取20μL注入液相色谱仪,记录色谱图,头孢氨苄峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。测定法取本品约50mg,精密称定,置50mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取10mL,置50mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,精密量取10μL注入液相色谱仪,记录色谱图;另取头孢氨苄对照品适量,同法测定。按外标法以峰面积计算,即得。

二、实验过程

1、仪器、试药准备及试液的配制

1)仪器的准备

高效液相色谱仪、电子或分析天平(感量0.1mg)、容量瓶(50mL)、锥形瓶、移液管、玻璃棒、微量进样器(10μL)。

2)试药的准备

甲醇、醋酸钠、醋酸、头孢氨苄对照品。

3)试液的配制

3.86%醋酸钠溶液:取醋酸钠3.86g,加水使溶解成100mL,即得。

4%醋酸溶液:取醋酸4mL,加水适量使成100mL,摇匀。

2、检验过程

1)供试品溶液和对照品溶液的制备

(1)供试品溶液的制备取本品45～5mg,精密称定,置50mL容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取10mL,置50mL容量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,供试品溶液分别配制2份。供试品溶液在注入色谱柱前,一般应经适宜的0.45μm滤膜滤过。

(2)对照品溶液的制备取头孢氨苄对照品45～55mg,精密称定,置50mL容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取10mL,置50mL容量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。对照品溶液分别配制2份。对照品溶液在注入色谱柱前,一般应经适宜的0.45μm滤膜滤过。

2)操作前的准备

(1)流动相的制备取水742份,加甲醇240份,加3.86%醋酸钠溶液15份,加4%醋酸溶液3份,摇匀。制备好的流动相应经适宜的0.45μm滤膜滤过,用前脱气。

(2)检查上次使用记录和仪器状态检查仪器是否完好,色谱柱是否适用于本次试验,色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致,原保存溶剂与现用流动相能否互溶,流动相的pH与该色谱柱是否相适应等。

3)操作

(1)开机初始平衡时间一般约需30min。

(2)色谱条件和系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以水一甲醇-3.86%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液(742:240:15:3)为流动相;检测波长为254nm;取供试品溶液适量,在80水浴中加热60min,冷却,取20μL注入液相色谱仪,记录色谱图,头孢氨苄峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。

(3)测定分别取供试品溶液和对照品溶液各10μL注入液相色谱仪,记录色谱图。供试品溶液和对照品溶液每份至少注样2次,由全部注样结果(n≥4)求得平均值,相对标准偏差(RSD)一般应不大于1.5%。按下式计算供试品含量,应符合规定。