应用分享︱采用TSKgel G2000SWXL色谱柱测定促胰岛素分泌肽融合蛋白纯度
促胰岛素分泌肽(Exendin-4)是一种来源于美洲希拉毒蜥唾液中的含39个氨基酸的多肽,其作用机制与GLP-1类似,能够促进胰岛素的分泌、增加胰岛素敏感性、改善胰岛细胞功能。
促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-Fc fusion protein, 简称E4F4)是将Exendin-4与人IgG的Fc片段相连重新构建的结构蛋白,可在不影响药效的同时延长了药物的体内半衰期,有效改善Exendin-4 在机体内的药物代谢动力学特性。
本次分享的应用,作者采用了TSKgel G2000SWXL凝胶色谱柱建立了测定E4F4药物纯度的方法,经验证该方法适合E4F4纯度检测。
色谱柱: G2000SWXL (7.8 mmI.D.×30 cm, 5 μm)
流动相: 20 mMPBS(pH 6.8)
流速: 0.5 mL/min
进样体积: 50 μL
柱温: 20℃
检测器参数: UV@280 nm
图1 系统适用性色谱图
图2 专属性实验色谱图
采用TSKgel G2000SWXL色谱柱建立了促胰岛素分泌肽融合蛋白纯度测定方法,分离谱图见图1,空白溶剂在积分范围内无吸收峰出现,E4F4主峰的理论塔板数为4238 (>3000) ,对称因子为1.44 (>1.3)。
采用相对分子质量为60000的ATIII和相对分子质量为21000的 rh-CNTF为阴性对照,采集E4F4样品以及E4F4、ATIII、rh-CNTF混合样品的色谱图 (见图2) ,经计算,ATIII与E4F4分离度为 0.89,rh-CNTF与E4F4分离度均为4.32,3种样品分离度良好。
精密度测试结果,目标峰面积RSD为0.49% (n=6),保留时间RSD为0.11% (n=6),纯度RSD为0.01% (n=6)。以上结果说明该方法适合E4F4纯度检测。
参考资料:
1. 王婉如;高雪峰;刘宇阳;杨军;张艳丽;毛晓燕, 分子排阻高效液相色谱法检测促胰岛素分泌融合蛋白纯度. 微生物学免疫学进展. 2020,48(5):16-20