三耀精细化工品销售（北京）有限公司
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液相分析常见问题③ 保留时间不稳怎么办？
为啥保留时间总是挪来挪去？
为啥保留时间总是跳来跳去？
YoYo又来答疑解惑啦~
开熏不开熏 ღ( ´･ᴗ･` )比心
保留时间不稳定主要是由于液相系统 or 液相方法两方面所导致~
下面就让YoYo来给大家说道说道~
仪器系统问题
- 排 查 方 法 -
检查是否存在管线漏液
→ 检查仪器所有管线接口处，特别是色谱柱两端螺丝是否完全拧紧
检查是否泵中混入气泡
→ 检查压力波动，将流动相重新脱气并进行purge操作
检查是否泵供液不准
→ 分享一个判断泵供液准确性的小窍门：
将系统流速设为1 mL/min，手机or秒表计时1 min，确认1 min时间段出口流出液体体积是否为1 mL，即可判断泵是否准确供液~
液相方法问题
- 排 查 方 法 -
色谱柱及流动相温度
→ 建议使用柱温箱，保证柱温稳定
→ 保证室温恒定，即流动相温度恒定
充分平衡
→ 使用离子交换色谱柱或使用离子对试剂时，平衡时间不足将导致保留时间漂移，建议使用离子交换模式进行分析时，对色谱柱进行过夜充分平衡
流动相pH值
→ 离子型化合物可能由于流动相pH设定不合理而发生漂移，建议将流动相的pH值设定在化合物的pKa±2以上范围
洗脱方法
→ 复杂样品建议使用梯度条件分析，杂质的不完全洗脱可能导致主峰出峰时间变化。
离子交换模式下平衡对保留时间的影响
使用离子交换色谱柱分析时，由于平衡不够导致的出峰时间漂移。
解决方案：
加长平衡时间，可使用流动相小流速平衡过夜
事例：
使用强阳离子交换色谱柱——CAPCELL PAK SCX对三聚氰胺进行分析，随着平衡时间的延长，最终在平衡20h以上时达到保留时间的稳定。
三聚氰胺
HPLC Conditions:
Column: CAPCELL PAK SCX UG80 S5; 4.6 mm i.d. × 150 mm
M.Phase: 50 mM KH2PO4 ( pH 3.0 adjusted with H3PO4) / CH3CN = 70 / 30
Flow rate: 1 mL/min
Oven Temp.: 30°C
Detector: UV 240 nm
Sample: Melamine in M.P.
Inj. Vol.: 20 μL
遇到保留时间不稳的问题时，从以上几个方面进行排查，相信一定可以解决您的问题~
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