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液相分析常见问题② 不出峰怎么办?

大曹色谱
2022.8.11

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峰呢?我的峰去了哪里?

某天开机实验,色谱图一马平川…

峰呢?我的峰呢?要疯了啊啊啊啊…


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怎么办!!!

别怕,YoYo又来帮助你了~


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排查位点

遇到不出峰问题:

首先,判断原因——即不出峰发生位点。


-排查方法-

将色谱柱从仪器中取下,接入两通后再次进样

▷依旧不出峰——仪器系统出现问题

▷出峰——色谱柱洗脱或平衡问题


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原因&解决问题

1

仪器系统方面导致不出峰


-常见原因及解决方法-


【检测器部分】

★检测方法不合适

  紫外选择波长不合适

  质谱荷质比以及参数设立不合适

  荧光发射吸收波长不合适

  样品浓度过小检测器灵敏度不够...

→此时需要对检测方法进行优化调整

★检测器自身出现问题(如灯寿命到了)

→需要咨询相应仪器工程师进行更换


【进样器部分】

进样针进气泡导致样品并未真正进样成功,一般通过洗针即可解决。


色谱柱方面导致不出峰


-常见原因及解决方法-


【洗脱不足】

现有分析条件无法对目标物质进行良好洗脱,需对分析条件进行调整:

★反相系列色谱柱——提高有机相比例(PS: 注意不要发生盐析哦)

★离子交换系列色谱柱——提高用于离子交换的盐浓度

★HILIC系列色谱柱——适当提高水相比例


【平衡不充分】

若使用离子交换色谱柱,或离子交换模式分析时,初次平衡需要充足的平衡时间,建议使用流动相小流速平衡过夜。


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HPLC Conditions:

色谱柱:CAPCELL PAK NH2 UG80 S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm

流动相:磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾2.72g溶于1000 mL水中) / CH3CN = 45 / 55

流 速:40°C

检 测:PDA 286 nm

浓 度:1 mg/mL

进样量:20 µL


于是,现在不出峰的问题还是问题吗?


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