ASTM F2131-21
使用W-20小鼠基质细胞系的重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）体外生物活性的标准试验方法

Standard Test Method for In Vitro Biological Activity of Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-2 (rhBMP-2) Using the W-20 Mouse Stromal Cell Line

标准号

ASTM F2131-21

发布

2021年

发布单位

美国材料与试验协会

当前最新

ASTM F2131-21

 

 

适用范围

1.1 本测试方法描述了使用小鼠基质细胞系 W-20 克隆 17 (W-20-17) 测定 rhBMP-2 体外生物活性的方法和结果计算。该克隆源自 W++ 小鼠品系的骨髓基质细胞。2 1.2 该测试方法（测定）已根据国际协调委员会测定验证指南3（实验室间精度除外）进行了鉴定和验证，用于评估rhBMP-2 的生物活性。还研究了这种体外测试方法与体内骨形成的相关性。 W-20 生物测定中测得的反应（碱性磷酸酶诱导）与体内使用测试 (UT) 中 rhBMP-2 的异位骨形成能力相关。通过两种蛋氨酸的靶向过乙酸氧化而部分或完全失活的 rhBMP-2 被用作比较活性的工具。通过肽图分析和质谱分析表明，过乙酸对 rhBMP-2 的氧化可特异性靶向蛋氨酸。这些蛋氨酸位于 rhBMP-2 上的疏水性受体结合袋中。将氧化样品与孵育对照和天然对照进行比较。 62%、87%、98% 和 100% 氧化的样品的 W-20 活性水平分别为 62%、20%、7% 和 5%。孵育样品和天然对照样品保持 100% 活性。在 UT 中对样品进行了评估，结果显示失活对骨形成活性具有类似的影响。相对于孵育对照，W-20 测定中活性为 62% 和 20% 的样品显示骨形成水平降低，与 W-20 比活性降低的水平相似。 7% 和 5% 活性 rhBMP-2 植入物中很少或没有形成异位骨。
1.3 因此，受体结合位点中 rhBMP-2 分子的修饰降低了 W-20 和 UT 测定中的活性。这些数据表明，rhBMP-2 上的单个受体结合结构域负责体外和体内活性，并且 W-20 生物测定是 rhBMP-2 骨形成活性的相关预测因子。
1.4 以 SI 单位表示的值应被视为标准值。本标准不包含其他计量单位。
1.5 本标准并不旨在解决与其使用相关的所有安全问题（如果有）。本标准的使用者有责任建立适当的安全、健康和环境实践，并在使用前确定监管限制的适用性。
1.6 本国际标准是根据世界贸易组织贸易技术壁垒（TBT）委员会发布的《关于制定国际标准、指南和建议的原则的决定》中确立的国际公认的标准化原则制定的。

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