极端嗜热古菌——芝田硫化叶菌DNA 解旋酶的分离纯化和性质研究

摘　要:采用Q Sepharose 离子交换层析、磷酸纤维素P11 吸附层析、肝素琼脂糖吸附层析、Su2perdex 200 凝胶过滤和Phenyl Superose 疏水层析等步骤,从嗜酸热芝田硫化叶菌细胞裂解液中分离纯化了一个DNA 解旋酶。该解旋酶具有受DNA 激活的ATP 酶活性。根据SDS2PAGE 测定结果,该酶的分子质量约为63kD。芝田硫化叶菌DNA 解旋酶可以解开底物上70bp 的双链区,其解旋活性依赖于双链区旁的单链分叉。该解旋酶的活性依赖于Mg2 + 和ATP 的水解,在NaCl 浓度超过200mmolPL 时受到抑制。该酶的最适pH 为617。该酶在40 ℃～80 ℃之间均有活性,70 ℃时活性最高。芝田硫化叶菌DNA 解旋酶是从古菌中分离得到的第一个天然DNA解旋酶。