SD大鼠视网膜蛋白质组双向电泳图谱建立和初步分析

【摘要】　目的　建立优化SD 大鼠神经视网膜双向电泳(two2dimensional gel electrophore2sis ,22DE) 图像技术方法,并对正常视网膜蛋白质组图像进行初步分析。方法　雄性SD大鼠,断颈处死取眼球。在解剖显微镜下分离神经视网膜组织,液氮速冻,提取总蛋白质组份, - 70 ℃保存。部分视网膜标本立即固定后做光镜或电镜分析。应用22DE 技术,对提取的蛋白质进行分离。在一维等点聚焦、垂直SDS 凝胶电泳、银染(考染) 等关键技术上进行优化和重复实验,建立分辨率高和重复性良好的22DE 图像;联合图像扫描和图像分析软件,对正常SD 大鼠神经视网膜组织蛋白质组图像进行初步分析。结果　成功获得了分辨率和重复性良好的视网膜蛋白质22DE 图谱。每张电泳图谱可获得约3 000个左右可辨认的蛋白质斑点。其中大部分蛋白质点分布在pH4～8 范围内,其相对分子质量主要集中在25～100 区域。结论　22DE 技术可用于对神经视网膜蛋白质组份的分离和鉴定。本实验建立的技术为进一步进行视网膜蛋白质组学研究奠定了基础。