工作台冰柜
2019.7.31
一、目的与原理
当细菌处于容易吸收外源dna的状态时，即为感受态，而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。
二、材料和方法
1． 材料：大肠杆菌
2． 仪器：
离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜
3． 试剂
lb培养基，0.1m mgcl2，3mm氯化六氮合高钴
tfb：10mm mes（ph6.3）
45mm mncl2
10mm cacl2
10mm kcl
三、操作步骤
大肠杆菌在lb培养基平板上划线培养12-16小时，挑取单菌落于lb培养基摇瓶培养大肠杆菌到对数期。取1ml培养物7000rpm，离心3min，收集菌体。再重复一次。冰浴放置。用预冷的氯化镁悬浮菌体7000rpm离心3min。收集菌体，冰浴放置。用预冷的氯化钙悬浮菌体，冰浴15min, ......
......
重组片段的转化及克隆和筛选
：大肠杆菌2.仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜3.试剂LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ; TFB：10mM MES（pH 6.3）,45mM MnCl2, 10mM CaCl2
感受态菌的制备原理、仪器试剂和操作步骤
，在超净工作台中加入2ml LB（不含抗菌素！）培养基。（2）从超低温冰柜中取出XL1-Blue菌种，放置在冰上。在超净工作台中用烧红的接种环插入冻结的菌中，然后接入含2ml LB培养基的试管中，37℃摇床培养过夜。（3）取0.5ml上述菌液转接到含有50ml LB培养基的三角烧瓶中，37℃下250r/min摇床培养2~3h，测定OD600为0.375（
感受态制备：农杆菌感受态细胞制备实验
恒温摇床 冷冻高速离心机 高压灭菌锅 冰箱 超低温冰柜 分光光度计 接种针 试管 离心管 离心管 冰浴 微量进样器 吸头 实验步骤一、实验仪器、材料和试剂 1. 仪器超净工作台，恒温摇床，冷冻高速离心机，高压灭菌锅，冰箱，-70℃超低温
冷柜的分类
形式分类 强制风冷式冰柜 直冷式冰柜 风直冷混合制冷式冰柜 产品样式分类 立式柜 立风柜 岛柜 工作台 柜台柜 子母柜 后补式柜 卧式柜
农杆菌感受态细胞制备实验
硫酸镁 氯化钙 利福平储液 仪器、耗材 超净工作台 恒温摇床 冷冻高速
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