基因工程耐热碱性磷酸酯酶的表达与分离纯化

摘　要　目的　获得可用于探针的非放射性标记的耐热碱性磷酸酯酶。方法　把耐热碱性磷酸酯酶的基因克隆入质粒pJLA503 上,在E. coli Mph44 中表达。表达的酶用聚乙烯亚胺沉淀核酸,热变性,硫酸铵沉淀,层析等方法纯化。结果　经表达纯化后每克细菌可获得1. 5mg 的酶,酶的纯度为90 % ,比活为78. 4U/ mg。结论　耐热碱性磷酸酯酶可在E. coli Mph44 中表达,表达的酶可用热变性和其它蛋白质纯化方法来纯化。